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Piattaforma di vettore lentivirale per la consegna efficiente di strumenti di editing Epigenome nelle umane indotte da modelli di malattia derivati da cellule staminali pluripotenti
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Lentiviral Vector Platform for the Efficient Delivery of Epigenome-editing Tools into Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Disease Models
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Piattaforma di vettore lentivirale per la consegna efficiente di strumenti di editing Epigenome nelle umane indotte da modelli di malattia derivati da cellule staminali pluripotenti

DOI:
10.3791/59241-v

•

13:47 min

•

March 29, 2019

•

, , , , , , , ,
1Department of Neurology,Duke University Medical Center, 2Center for Genomic and Computational Biology,Duke University Medical Center, 3Viral Vector Core,Duke University Medical Center, 4Division of Gynecologic Oncology, Department of Obstetrics and Gynecology,Duke University Medical Center

Chapters

  • 00:04Title
  • 02:01Plasmid Design and Construction
  • 03:20HEK-293T Cells Culturing, Plating, and Transfection
  • 05:15Virus Harvesting and Viral Particles Concentrating
  • 08:16Transduction of MD NPCs
  • 09:48Analysis of Methylation Changes
  • 11:04Results: Assessment of the LV-dCas9-DNMT3A-GFP/Puro Vectors Compared to the Naive GFP Counterpart
  • 12:45Conclusion

Summary

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Mirati epigenome DNA modifica rappresenta un approccio terapeutico potente. Questo protocollo descrive la produzione, purificazione e concentrazione di vettori lentivirali all-in-one che harboring il transgene CRISPR-dCas9-DNMT3A per applicazioni di modifica epigenome in cellule staminali pluripotenti indotte umane (hiPSC)-derivato di neuroni.

Tags

Lentiviral VectorEpigenome EditingHuman Induced Pluripotent Stem CellsDisease ModelsCRISPR/CasAlpha-synucleinGene ExpressionGuide RNAMolecular CloningPlasmid ConstructionNeural Progenitor CellsDNA Methyltransferase (DNMT3A)

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