Rats içinde bulaşıcı esneme ölçmek için bir laboratuar yöntemi

Protokolümüz önemlidir çünkü sıçanlarda hangi duyuların bulaşıcı esneme de dahil olabileceğini araştırmak için kolay bir yol sağlar. İnvaziv olmayan bir prosedürün kullanılması ve bulaşıcı esneme ölçümü için hesaplamayı hızlandıran uygulama yazılımının kullanılabilirliği bu tekniğin başlıca avantajlarıdır. Bu tekniği hiç uygulamamış bireyler, her adımı sistemli bir şekilde takip etmeleri ve gözlem olgusunu yaparken profesyonel danışmanlık almaları koşuluyla uygulamada büyük zorluklarla karşılaşmamalıdır.

Bu yöntemin görsel gösterimi, deney sırasında gözlem kafeslerinin mekansal düzenlenmesinin anlaşılmasına yardımcı olur. Tedavilerin belirlenmesinde hatalarıönlemek için yardımcı olur. Bu prosedürü gösteren Evelyn Beristain-Castillo, benim laboratuvar bir postdoc olacaktır.

Bir test oturumu ayarlamak için, tek tek kafeslerde gözlem odasına dört sıçan transfer. Hayvanlar alışarken, odayı yeterince aydınlatan bir tavan lambasının altına daha büyük dikdörtgen bir masanın üzerine ters t şeklinde bir masa yerleştirin. Filtre kağıdını her gözlem kafesinin altına yerleştirin ve kafesleri ters t şeklindeki tablonun her iki tarafına çiftler halinde yerleştirin.

Her kafes çifti arasına bir bölücü yerleştirin ve stratejik olarak her fare çiftinin esneme davranışını kaydeden iki dijital kamera yerleştirin. Kameraların tripodlara güvenli bir şekilde sabitlendiğini ve gözlem kafeslerine doğru şekilde yönlendirildiğini doğruladıktan sonra, farelerin davranışlarını aynı anda izlemek için kameraları bir masaüstü bilgisayara bağlayın. Hayvanlar 15 dakika boyunca alıştığında, önceden belirlenen tahsisata göre gözlem kafeslerine yerleştirin ve otomatik odağı her kafese ayarlayın.

Video kaydını ve kronometreyi aynı anda başlatın ve 60 dakikalık gözlem süresinin sonunda video kaydını durdurun. Gözlem bittiğinde, fareleri yiyecek ve suya erişimi olan hayvan tesisindeki ev kafeslerine geri getirin. Daha sonra gözlem kafeslerini toksik olmayan bir deterjanla iyice temizleyin ve sonraki test seanslarını gün için gerçekleştirmek üzere deneysel seti hazırlayın.

Son oturumdan sonra, bir gözlemci için herhangi bir standart oynatma sistemini kullanarak her videoyu bilgisayar ekranında oynatın. Gözlemcinin esneme davranışını normal hızda bir kez gözlemlemek ve veri sayfalarına kaydetmek için her videoyu ilk kez görüntülemesini ve ardından esnemeyi gözlemlemeni ve ölçmeyi kolaylaştırmak için daha yavaş hızlarda ek görüntülemeyi izlemesini sağlar. Esneme puan için, bir üst yazı olarak yazılmış dakika ile bir esneme oluşumunu temsil etmek için dikey çizgiler kullanın.

Tüm esnemeler puanlandığında, her sıçandaki esnemelerin zamansal dizisini bir elektronik tabloya aktarın. Esneme en yakın dakikaya kaydedildiyse, ilgili her dakikadaki esneme sayısını girin ve belirli bir dakika içinde esneme meydana gelmediğinde hücreleri doldurmak için sıfır kullanın. Ardından çalışma sayfasını metin dosyası olarak kaydedin.

Esneme bir dakikanın en yakın ondalık sayısına kaydedildiyse, sırayı yukarıdan aşağıya yazın. Satırlarda esneme sayısının sütununkinden daha düşük olduğu fare sütunlarının boş alanlarını doldurmak için NA'yı kullanın. Bir sıçan için kaydedilen en fazla esneme sırası sayısıyla.

Ardından çalışma sayfasını metin dosyası olarak kaydedin. Tüm veriler girildiğinde, metin dosyasını R uzantı koduyla program kodlarını R'ye kaydedin ve esnemenlerin isterteger veya kesirli sayılar olarak kaydedilip kaydedilmediğine bağlı olarak belirli program kodunu indirin. Sonra sıçanlar ve zaman dilimleri istenilen sayıda her çift için programı çalıştırın.

Çalışma sonunda, her sıçan esneme sayısının rasgele bir dağıtım kullanarak programı yeniden çalıştırın. Esneme bulaşıcı eğrileri oluşturmak için, her fare çifti için bulaşıcı olmayan bulaşma oranlarını, zaman penceresini ve test durumunu, gözlenen verilerin ve yapay verilerin analizlerini ayıran bulaşıcı olmayan oranları çıkarmak için elektronik tabloda daha önce kaydedilmiş verileri kullanın. Bu temsili deneyde, yabancı erkek sıçanlar arasındaki esneme bulaşması, 1 ila 10 dakika arasında değişen bir dizi zaman penceresi üzerinde ölçüldü.

Bu esneme bulaşma eğrileri, kafeslerde delikli opak bölücü ile fareler arasında sadece koku iletişiminin esneme bulaşması sergilediğini göstermektedir. Ortalamaların güven aralığı 60 dakikalık periyotta rastgele ayrılan esneme sayısının güven aralığıyla örtüşmediği için, dört ve sonraki zaman aralığından bellidir. Grup, beklendiği gibi, gözlem döneminde her sıçanda esneme sayısının rasgele bir tahsisi, herhangi bir belirgin desen göstermeden yaklaşık sıfır salınımlı esneme oranları üretti belirtti.

Tanıdık erkek sıçanlar ile bu temsili deneyde, onların güven aralıkları rasgele oluşturulan güven aralığı bandı ile örtüşen çünkü dört test durumlarda hiçbiri esneme bulaşması teşvik. Ayrıca, sıfır eğimden farklı olan 10 zaman penceresinde esneme bulaşmasındaki genel artışa rağmen dört test durumu arasında hiçbir fark yoktu. Sonuçların doğru yorumlanması için farelerin tanıdık ve yabancı kimliklerini takip etmeyi ve deneyler arasındaki gözlem kafeslerini temizlemeyi unutmayın.

Bir farmakolojik prosedür işitsel iletişimi engellemek için kullanılabilir, ve tamamen diğer duyuların etkileri bulaşıcı esneme üzerindeki işitme etkileri ayırmak için. Bu teknik, hem ilgili duyular açısından türler arasında bulaşıcı esneme karşılaştırmak için yol açmıştır, ve bulaşıcı esneme eğrileri karşılaştırarak yanıt gücü. Onlar yanlışlıkla kırAbilir ve yaralanmalara neden olabilir, çünkü dikkatle gözlem kafesleri ele unutmayın.