Name: 线虫中耳炎群链球菌引起氧化应激的研究 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: 了解利用秀丽隐杆线虫研究中耳炎群链球菌产生过氧化氢诱导氧化应激反应的实验方法。该技术使用生物活性氧源可持续地研究宿主-病原体相互作用及应激反应激活机制。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

我们感谢德克萨斯大学牙医学院的王 Bing-Yan 博士、Gena Tribble 博士，路易斯维尔大学牙医学院的 Richard Lamont 博士，以及 MD 安德森癌症中心的 Samuel Shelburne 博士，提供了血链球菌群的实验室和临床菌株。我们还要感谢哈佛医学院遗传学系的 Keith Blackwell 博士提供了 C. elegans 线虫菌株。最后，我们感谢德克萨斯大学 McGovern 医学院 Danielle Garsin 博士及其研究团队提供了开展本研究所需的试剂和线虫菌株。部分线虫菌株由CGC提供，CGC由美国国立卫生研究院研究基础设施项目（P40 OD010440）资助。

1. THY（Todd-Hewitt 酵母提取物）琼脂平板的制备
<ol>
	<li>配制1 L培养基时，向2 L锥形瓶中加入30 g Todd-Hewitt粉末、2 g酵母提取物和20 g琼脂。向瓶中加入970 mL去离子水，并放入一个搅拌子。在121 °C温度和15 lb/inch2压力下高压灭菌30分钟。随后将培养基置于磁力搅拌器上，边搅拌边冷却。</li>
	<li>在超净工作台中，将培养基倒入适当大小的无菌培养皿中（细菌培养与保藏使用100 mm × 15 mm培养皿，杀菌实验使用35 mm × 10 mm培养皿）。在超净台内静置干燥2小时。此后，培养皿可在4 °C保存1个月。</li>
</ol>
2. 线虫生长培养基（NGM）和RNAi饲喂平板（NGM RNAi）的制备
<ol>
	<li>使用搅拌子，在2 L的锥形瓶中将2.5 g蛋白胨和3 g NaCl溶解于970 mL去离子水中。向培养基中加入20 g琼脂。在121 °C温度和15 lb/inch2压力下高压灭菌30分钟。将培养基置于搅拌台上，轻轻搅拌使其冷却。</li>
	<li>为制备NGM平板，向培养基中加入以下溶液：25 mL 1 M磷酸钾缓冲液（pH = 6.0）、1 mL 1 M MgSO4、1 mL 1 M CaCl2、1 mL（5 mg/mL溶于95%乙醇）胆固醇、1 mL（10% v/w溶于乙醇）制霉菌素和1 mL 25 mg/mL链霉素。</li>
	<li>为制备NGM RNAi饲喂平板，向培养基中加入以下溶液：25 mL 1 M磷酸钾缓冲液（pH = 6.0）、1 mL 1 M MgSO4、1 mL 1 M CaCl2、1 mL（5 mg/mL溶于95%乙醇）胆固醇、1 mL（10% v/w溶于乙醇）制霉菌素、1 mL 50 mg/mL羧苄青霉素和1 mL IM IPTG。</li>
	<li>在层流条件下将培养基倒入60 mm × 15 mm无菌培养皿中。在层流罩下静置干燥2小时。随后，平板可在4 °C保存1个月。</li>
</ol>
3. C. elegans 的培养与维持
<ol>
	<li>在NGM平板中央滴加50 µL过夜培养的E. coli OP50菌液进行接种。该E. coli菌种先前已在Luria-Bertani（LB）培养基中培养，并于4 °C保存数月。盖好平板，在超净工作台中静置干燥24小时，随后将平板存放在聚苯乙烯容器中。</li>
	<li>在体视显微镜下，用无菌线虫挑取针挑取10至12条性成熟成虫，转移至已接种E. coli OP50的NGM平板上。于20 °C培养过夜。</li>
	<li>次日，用无菌线虫挑取针移除成虫，让胚胎在20 °C继续发育至L4幼虫阶段（约2.5天）。</li>
</ol>
4. 蛔虫同步化年龄群体的制备
<ol>
	<li>用 M9W 缓冲液冲洗两到四个 NGM 平板上的成年 gravid 线虫，并收集至一个 15 mL 圆锥形离心管中。
	<ol>
		<li>制备 M9W 缓冲液：将 3 g NaCl、6 g Na2HPO4 和 3 g KH2PO4 溶解于 1 L 去离子水中，定容后高压灭菌，再加入 1 mL 1 M MgSO4。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>以 450 × g 离心 1 分钟，弃去上清液，注意保持线虫沉淀完整。</li>
	<li>加入 400 µL 8.25% 次氯酸钠（家用漂白剂）和 100 µL 5 N NaOH，配制线虫裂解液。将裂解液加入线虫沉淀中，轻轻弹击离心管使内容物混匀，直至约 70% 的成年线虫被裂解。定期在解剖显微镜下观察管内样品，确保卵未被过度漂白。</li>
	<li>向离心管中加入 10 mL M9W 缓冲液，稀释漂白液混合物。</li>
	<li>以 450 × g 离心 1 分钟，弃去上清液，再加入 10 mL M9W 缓冲液。</li>
	<li>重复步骤 4.5 两次。</li>
	<li>将所得的卵沉淀重悬于 3–5 mL M9W 缓冲液中，将离心管置于旋转仪上，在室温（RT）下以 18 rpm 的速度旋转过夜。</li>
	<li>次日，以 450 × g 离心 1 分钟，使 L1 幼虫沉淀。用移液器吸除大部分 M9W 缓冲液，保留约 250 µL 液体。重悬 L1 幼虫，取 3 滴、每滴 5 µL 的线虫悬液置于培养皿盖上，使用解剖显微镜估算每 µL 中的线虫数量。</li>
</ol>
5. 在线虫中诱导RNAi
<ol>
	<li>使用无菌接种环或接种针，将含有RNAi的 E. coli 菌株（Ahringer和Vidal文库）从冻存菌种中取出，划线接种于含有50 µg/mL羧苄青霉素和15 µg/mL四环素的100 mm × 15 mm LB琼脂平板上。于37 °C培养24 h。</li>
	<li>从目标RNAi菌株平板上挑取单个孤立菌落，接种至含有2 mL LB培养基（补充50 µg/mL羧苄青霉素）的无菌15 mL锥形管中。于37 °C、150 rpm振荡培养16 h。</li>
	<li>次日，用无菌涂布棒将150 µL过夜培养的菌液均匀涂布于65 mm × 15 mm NGM RNAi喂养平板上。于37 °C培养24 h。</li>
	<li>将平板在37 °C培养后取出，冷却至室温。向接种了E. coli的NGM RNAi喂养平板中加入适量体积的M9缓冲液，其中含有约200条L1期幼虫（来自同步化发育的线虫群体）。于20 °C培养，直至幼虫发育至L4期（约2.5天）。</li>
</ol>
6. 感染用米提斯链球菌组的制备
<ol>
	<li>将目标链球菌菌株划线接种于100 mm × 15 mm的THY琼脂平板上（若平板储存于4 °C，接种前需将平板预热至37 °C），然后将平板置于烛缸中，于37 °C培养过夜（约18 h），以提供链球菌生长所需的微需氧环境（划线后的平板可在4 °C保存一周）。</li>
	<li>如需扩增链球菌的临床分离株，应使用胰蛋白酶大豆血琼脂平板。将平板置于烛缸中，于37 °C培养过夜（约18 h）。</li>
	<li>次日，从烛缸中取出平板，用无菌接种环挑取单个菌落，接种至含有2 mL THY液体培养基的15 mL无菌锥形管中。如需扩增链球菌的临床分离株，应在THY液体培养基中添加5% v/v的绵羊血。旋紧管盖，在37 °C静置培养。</li>
</ol>
7. 存活率检测
注意：本实验涉及的步骤如图1所示。为证明由缓症链球菌群产生的H2O2是导致线虫死亡的原因，可在培养基中添加过氧化氢酶，或使用S. gordonii的突变株ΔspxB及其互补株ΔspxB;spxB+。SpxB编码一种丙酮酸氧化酶，该酶负责缓症链球菌群中H2O2的生成。
<ol>
	<li>将 35 mm × 10 mm 的 THY 平板预热至 37 °C。加入 80 µL 过夜培养的目标链球菌菌株培养物，使用无菌涂布棒将细菌完全均匀涂布于琼脂表面。将平板置于烛缸中，于 37 °C 培养过夜（约 18 小时）。作为对照，将 80 µL 过夜培养的 E. coli OP50 菌液接种至两块 35 mm × 10 mm 的 NGM 平板上，于 37 °C 过夜培养。</li>
	<li>为验证由缓症链球菌群产生的 H2O2 是导致线虫死亡的原因，在 THY 平板上加入含 1,000 单位过氧化氢酶（catalase c）的 50 µL 溶液。使用无菌涂布棒将过氧化氢酶溶液均匀涂布，并将平板置于超净工作台中干燥 30 分钟。随后按照步骤 7.1 所述方法，将相应的链球菌菌株接种至平板上。</li>
	<li>次日，从烛缸中取出平板，室温静置 10–15 分钟使其冷却。使用无菌线虫挑取工具，将 30 条 L4 期幼虫从 NGM 或 NGM RNAi 饲喂平板转移至接种了链球菌的 THY 平板。每种链球菌菌株使用两块接种平板，共 60 条线虫。将平板置于 25 °C 培养。</li>
	<li>使用体视显微镜，在多个时间点分别计数每块平板上存活和死亡的 L4 期幼虫数量。初始阶段每 30 分钟记录一次线虫存活状态；当线虫开始快速死亡后，改为每 15 分钟记录一次。使用无菌线虫挑取工具轻轻触碰线虫，判断其是否存活。若线虫对触碰无任何运动反应，则判定为死亡。</li>
	<li>该实验通常需 5–6 小时完成。重复实验两次。实验结束后，合并两块平板的数据。输入各组数据，比较生存曲线，并使用统计学软件进行 Kaplan-Meier 生存分析。</li>
</ol>
8. 显微镜用琼脂糖垫的制备
<ol>
	<li>将2% w/v琼脂糖溶于去离子水中，通过微波加热使溶液溶解。5 mL溶液足以制备20张载玻片。</li>
	<li>沿两条玻璃载玻片的长度方向粘贴实验室胶带，以确定琼脂糖垫的厚度。将一张洁净的玻璃载玻片置于两条贴好胶带的载玻片之间。</li>
	<li>在洁净载玻片中央加入100 µL熔融琼脂糖，立即在其上覆盖另一张洁净的玻璃载玻片，并轻轻按压形成垫片。待琼脂糖凝固后，移去上方的载玻片。琼脂糖垫即可使用。</li>
</ol>
9. 观察 SKN-1 在响应中的定位 链球菌 感染
注意：本实验涉及的步骤如图2所示。使用携带SKN-1B/C::GFP转基因的线虫品系检测SKN-1的定位。为证明由于缓症链球菌（mitis group）产生H2O2所导致的SKN-1定位变化，采用了野生型（WT）、ΔspxB突变株以及互补菌株&#160;ΔspxB;spxB+的S. gordonii。此外，利用SKN-1B/C::GFP转基因报告品系及RNAi干扰技术，验证了p38 MAPK信号通路中的组分可调控SKN-1的定位。
<ol>
	<li>将 35 mm × 10 mm 的 THY 平板预热至 37 °C。加入 80 µL 过夜培养的目标链球菌菌株培养物，并使用无菌涂布棒将细菌完全涂布于琼脂表面。将平板置于烛缸中，于 37 °C 培养过夜（约 18 小时）。作为对照，将 80 µL 过夜培养的 E. coli OP50 菌液接种至三块 35 mm × 10 mm 的 NGM 平板上，并于 37 °C 培养约 18 小时。</li>
	<li>次日，从烛缸中取出平板，室温静置 10–15 分钟使其冷却。使用 M9W 缓冲液从 NGM 及 NGM RNAi 饲喂平板上冲洗 L4 期幼虫。将线虫收集至 15 mL 圆底离心管中。</li>
	<li>以 450 × g 离心 1 分钟。弃去上清液，加入 10 mL M9W 缓冲液。</li>
	<li>重复步骤 9.3 三次。</li>
	<li>将线虫重悬于约 250 µL M9W 缓冲液中，取三滴（每滴 5 µL）虫悬液置于洁净的培养皿盖上，使用解剖显微镜估算每 µL 中的线虫数量。</li>
	<li>向每块 THY 链球菌接种平板及 NGM E. coli 接种平板中各加入约 100 条 L4 期幼虫。每种细菌菌株使用三块平板。于 25 °C 培养 2 至 3 小时。</li>
	<li>随后，从培养箱中取出平板，用 M9W 缓冲液冲洗，并将线虫收集至 15 mL 圆底离心管中。</li>
	<li>按照步骤 9.3 所述方法清洗线虫 3 次。</li>
	<li>用移液法吸除大部分 M9W 缓冲液，向线虫沉淀中加入 500 µL 含 2 mM 叠氮化钠或 2 mM 盐酸四咪唑的 M9W 缓冲液。此步骤可麻醉线虫，确保在显微镜下观察时无运动发生。 
	注意：操作叠氮化钠时需佩戴个人防护装备（PPE）。叠氮化钠溶液应在化学通风橱中配制。</li>
	<li>将线虫沉淀于室温孵育 15 分钟。然后取 15 µL 虫悬液点样于预先制备的琼脂糖垫上。轻轻将 1.5 号盖玻片覆盖在含有麻醉线虫的琼脂糖垫上。</li>
	<li>使用荧光显微镜，结合 FITC 和 DAPI 滤光片观察 SKN-1 的定位情况。以 10× 和 20× 放大倍数对线虫成像。</li>
	<li>根据 SKN-1 的定位水平对线虫进行评分。SKN-1 无核定位、SKN-1B/C::GFP 定位于线虫前部或后部、以及 SKN-1B/C::GFP 在所有肠细胞中均出现核定位，分别归类为低、中、高水平的定位。</li>
	<li>完成荧光显微图像评分后，使用统计学软件通过卡方检验和 Fisher 精确检验确定组间统计学差异。</li>
</ol>

<ol><li>Human Microbiome Project, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure%2C+function+and+diversity+of+the+healthy+human+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structure, function and diversity of the healthy human microbiome.</a> Nature. 486 (7402), 207-214 (2012).</li>
<li>Mitchell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+mitis%3A+walking+the+line+between+commensalism+and+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Oral+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Streptococcus mitis: walking the line between commensalism and pathogenesis.</a> Molecular Oral Microbiology. 26 (2), 89-98 (2011).</li>
<li>Dyson, C., Barnes, R. A., Harrison, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infective+endocarditis%3A+an+epidemiological+review+of+128+episodes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infection%22%5BJournal%5D)">Infective endocarditis: an epidemiological review of 128 episodes.</a> Journal of Infection. 38 (2), 87-93 (1999).</li>
<li>Sahasrabhojane, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Species-level+assessment+of+the+molecular+basis+of+fluoroquinolone+resistance+among+viridans+group+streptococci+causing+bacteraemia+in+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Antimicrobial+Agents%22%5BJournal%5D)">Species-level assessment of the molecular basis of fluoroquinolone resistance among viridans group streptococci causing bacteraemia in cancer patients.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 43 (6), 558-562 (2014).</li>
<li>Shelburne, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+mitis+strains+causing+severe+clinical+disease+in+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Emerging+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Streptococcus mitis strains causing severe clinical disease in cancer patients.</a> Emerging Infectious Diseases. 20 (5), 762-771 (2014).</li>
<li>van der Meer, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution%2C+antibiotic+susceptibility+and+tolerance+of+bacterial+isolates+in+culture-positive+cases+of+endocarditis+in+The+Netherlands%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Clinical+Microbiology+%26+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Distribution, antibiotic susceptibility and tolerance of bacterial isolates in culture-positive cases of endocarditis in The Netherlands.</a> European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 10 (9), 728-734 (1991).</li>
<li>Han, X. Y., Kamana, M., Rolston, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viridans+streptococci+isolated+by+culture+from+blood+of+cancer+patients%3A+clinical+and+microbiologic+analysis+of+50+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Viridans streptococci isolated by culture from blood of cancer patients: clinical and microbiologic analysis of 50 cases.</a> Journal of Clinical Microbiology. 44 (1), 160-165 (2006).</li>
<li>Hoshino, T., Fujiwara, T., Kilian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+phylogenetic+and+phenotypic+analyses+to+identify+nonhemolytic+streptococci+isolated+from+bacteremic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Use of phylogenetic and phenotypic analyses to identify nonhemolytic streptococci isolated from bacteremic patients.</a> Journal of Clinical Microbiology. 43 (12), 6073-6085 (2005).</li>
<li>Kohno, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectious+complications+in+patients+receiving+autologous+CD34-selected+hematopoietic+stem+cell+transplantation+for+severe+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Infectious+Disease%22%5BJournal%5D)">Infectious complications in patients receiving autologous CD34-selected hematopoietic stem cell transplantation for severe autoimmune diseases.</a> Transplant Infectious Disease. 11 (4), 318-323 (2009).</li>
<li>Zhu, L., Kreth, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+hydrogen+peroxide+in+environmental+adaptation+of+oral+microbial+communities%5BTitle%5D)+AND+%22Oxidative+Medicine+and+Cellular+Longevity%22%5BJournal%5D)">The role of hydrogen peroxide in environmental adaptation of oral microbial communities.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. , 717843(2012).</li>
<li>Okahashi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+contributes+to+the+epithelial+cell+death+induced+by+the+oral+mitis+group+of+streptococci%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide contributes to the epithelial cell death induced by the oral mitis group of streptococci.</a> PLoS One. 9 (1), 88136(2014).</li>
<li>Stinson, M. W., Alder, S., Kumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+and+killing+of+human+endothelial+cells+by+viridans+group+streptococci%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Invasion and killing of human endothelial cells by viridans group streptococci.</a> Infection and Immunity. 71 (5), 2365-2372 (2003).</li>
<li>Rai, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+secretes+hydrogen+peroxide+leading+to+DNA+damage+and+apoptosis+in+lung+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae secretes hydrogen peroxide leading to DNA damage and apoptosis in lung cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (26), 3421-3430 (2015).</li>
<li>Braun, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumococcal+pneumolysin+and+H%282%29O%282%29+mediate+brain+cell+apoptosis+during+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Pneumococcal pneumolysin and H(2)O(2) mediate brain cell apoptosis during meningitis.</a> Journal of Clinical Investigation. 109 (2), 19-27 (2002).</li>
<li>Naji, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+activation+of+the+oxidative+stress+response+transcription+factor+SKN-1+in+Caenorhabditis+elegans+by+mitis+group+streptococci%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The activation of the oxidative stress response transcription factor SKN-1 in Caenorhabditis elegans by mitis group streptococci.</a> PLoS One. 13 (8), 0202233(2018).</li>
<li>Bolm, M., Jansen, W. T., Schnabel, R., Chhatwal, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide-mediated+killing+of+Caenorhabditis+elegans%3A+a+common+feature+of+different+streptococcal+species%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide-mediated killing of Caenorhabditis elegans: a common feature of different streptococcal species.</a> Infection and Immunity. 72 (2), 1192-1194 (2004).</li>
<li>Sifri, C. D., Begun, J., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+worm+has+turned--microbial+virulence+modeled+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The worm has turned--microbial virulence modeled in Caenorhabditis elegans.</a> Trends in Microbiology. 13 (3), 119-127 (2005).</li>
<li>Irazoqui, J. E., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((99th+Dahlem+conference+on+infection%2C+inflammation+and+chronic+inflammatory+disorders%3A+Caenorhabditis+elegans+as+a+model+to+study+tissues+involved+in+host+immunity+and+microbial+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Immunology%22%5BJournal%5D)">99th Dahlem conference on infection, inflammation and chronic inflammatory disorders: Caenorhabditis elegans as a model to study tissues involved in host immunity and microbial pathogenesis.</a> Clinical & Experimental Immunology. 160 (1), 48-57 (2010).</li>
<li>Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+Oxygen+Species+and+Aging+in+Caenorhabditis+elegans%3A+Causal+or+Casual+Relationship%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants+%26+Redox+Signaling%22%5BJournal%5D)">Reactive Oxygen Species and Aging in Caenorhabditis elegans: Causal or Casual Relationship.</a> Antioxidants & Redox Signaling. 13 (12), 1911-1953 (2010).</li>
<li>Tissenbaum, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+C.+elegans+for+aging+research%5BTitle%5D)+AND+%22Invertebrate+Reproduction+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Using C. elegans for aging research.</a> Invertebrate Reproduction & Development. 59, Sup 1 59-63 (2015).</li>
<li>Blackwell, T. K., Steinbaugh, M. J., Hourihan, J. M., Ewald, C. Y., Isik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SKN-1%2FNrf%2C+stress+responses%2C+and+aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">SKN-1/Nrf, stress responses, and aging in Caenorhabditis elegans.</a> Free Radical Biology & Medicine. 88, Pt B 290-301 (2015).</li>
<li>Irazoqui, J. E., Urbach, J. M., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+host+innate+defence%3A+insights+from+Caenorhabditis+elegans+and+primitive+invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Evolution of host innate defence: insights from Caenorhabditis elegans and primitive invertebrates.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (1), 47-58 (2010).</li>
<li>Park, S. K., Tedesco, P. M., Johnson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+and+longevity+in+Caenorhabditis+elegans+as+mediated+by+SKN-1%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress and longevity in Caenorhabditis elegans as mediated by SKN-1.</a> Aging Cell. 8 (3), 258-269 (2009).</li>
<li>An, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+the+Caenorhabditis+elegans+oxidative+stress+defense+protein+SKN-1+by+glycogen+synthase+kinase-3%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Regulation of the Caenorhabditis elegans oxidative stress defense protein SKN-1 by glycogen synthase kinase-3.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (45), 16275-16280 (2005).</li>
<li>An, J. H., Blackwell, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SKN-1+links+C.+elegans+mesendodermal+specification+to+a+conserved+oxidative+stress+response%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">SKN-1 links C. elegans mesendodermal specification to a conserved oxidative stress response.</a> Genes & Development. 17 (15), 1882-1893 (2003).</li>
<li>Moy, T. I., Mylonakis, E., Calderwood, S. B., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxicity+of+hydrogen+peroxide+produced+by+Enterococcus+faecium%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Cytotoxicity of hydrogen peroxide produced by Enterococcus faecium.</a> Infection and Immunity. 72 (8), 4512-4520 (2004).</li>
<li>Pincus, Z., Mazer, T. C., Slack, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autofluorescence+as+a+measure+of+senescence+in+C.+elegans%3A+look+to+red%2C+not+blue+or+green%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">Autofluorescence as a measure of senescence in C. elegans: look to red, not blue or green.</a> Aging (Albany NY). 8 (5), 889-898 (2016).</li>
<li>Teuscher, A. C., Ewald, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+Autofluorescence+to+Assess+GFP+Expression+During+Normal+Physiology+and+Aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Overcoming Autofluorescence to Assess GFP Expression During Normal Physiology and Aging in Caenorhabditis elegans.</a> Bio-protocol. 8 (14), (2018).</li>
</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

所述方法也可用于其他致病性细菌，例如在厌氧或微需氧条件下生长时同样产生 H2O2 的Enterococcus faecium26。通常情况下，大多数致病生物完成存活率检测需要数天至数周时间。然而，由于缓症链球菌组（mitis group）成员能够稳定地产生 H2O2，在所述条件下，这些检测可在 5–6 小时内完成。这确保了能够在较短时间内筛选出多个与宿主免疫和氧化应激反应相关的候选基因。
在本实验方案中，细菌产生的 H2O2 直接与线虫的肠细胞接触，而不同于其他必须穿越多重屏障的外源性活性氧（ROS）来源。这确保了 H2O2 能有效递送至肠细胞，因此在线虫中可观察到更强的杀伤反应。通过使用荧光标记的细菌发现，线虫需暴露于病原体中 30 分钟，才能实现肠道的完全定植15。建议使用少于一周的链球菌菌株...

轻链球菌群是人类口咽腔的共生菌1。然而，这些微生物可逃离该生态位并引发多种侵袭性疾病2。这些微生物引起的感染包括菌血症、心内膜炎和眶周蜂窝织炎2,3,4,5,6。此外，它们正逐渐成为免疫功能低下、中性粒细胞减少以及接受过化疗的癌症患者发生血流感染的致病因子5,7,8,9。
由于目前鉴定出的毒力因子较少，口腔链球菌群（mitis group）致病机制尚不明确。已知该菌群能够产生过氧化氢（H2O2），其在口腔微生物群落中发挥着重要作用10。最近，多项研究强调了H2O2作为一种细胞毒素的作用，可诱导上皮细胞死亡11,12。属于该菌群的肺炎链球菌（S. pneumoniae）已被证实可产生高水平的H2O2，导致肺泡细胞发生DNA损伤和凋亡13。在急性肺炎动物模型中，相同研究人员证明细菌产生的H2O2赋予其毒力优势。关于肺炎球菌性脑膜炎的研究也表明，病原体来源的H2O2与肺炎溶素协同作用，触发神经元细胞死亡14。这些发现明确表明，该类细菌产生的H2O2在其致病性中具有重要作用。
有趣的是，已有研究表明，S. mitis 和 S. oralis 等属于米提斯组（mitis group）的成员可通过产生 H2O215,16 导致线虫 C. elegans 死亡。这种自由生活的线虫已被用作一种结构简单且遗传上易于操作的模型，用于研究多种生物学过程。近年来，该线虫更逐渐成为研究宿主-病原体相互作用的模型系统17,18。此外，多项研究强调了利用该生物体研究氧化应激的重要性19,20,21。其生命周期短、可通过RNAi技术敲低目的基因，以及可利用绿色荧光蛋白（GFP）融合报告基因监测基因表达等特性，使其成为一种极具吸引力的模型系统。更重要的是，该线虫中调控氧化应激和先天免疫的信号通路与哺乳动物高度保守20,22。
在本方案中，将展示如何使用 秀丽隐杆线虫 阐明由链球菌衍生的H所引起的致病性2O2一种改良的存活率检测方法被展示，其中草绿色链球菌群的成员能够快速杀死线虫 通过 H的生成2O2利用缓症链球菌组（mitis group）成员可提供持续的生物性活性氧（ROS）来源，与诱导线虫氧化应激的化学来源相对。此外，这些细菌能够快速定植于线虫体内，从而实现H2O2 直接靶向肠道细胞（相较于其他需穿越多重屏障的递送方式）。该检测方法的验证可通过以下任一方式进行：1）测定存活率 skn-1 突变菌株或 2) 通过敲低 skn-1 使用RNAi处理的线虫相对于N2野生型和载体对照处理的线虫。SKN-1是一种重要的转录因子，可调控氧化应激反应 秀丽隐杆线虫23,24,25除了生存实验外，还使用表达 SKN-1B/C::GFP 转基因报告基因的线虫品系来监测氧化应激反应的激活情况 通过 H的生成2O2 由草绿色链球菌群。

<table><tbody><tr><td>&lt;强&gt;培养基与化学试剂&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>琼脂糖&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9539-50G</td><td></td></tr><tr><td>胰蛋白胨&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0118-17-0</td><td></td></tr><tr><td>BD Bacto Todd Hewitt 肉汤</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0492-17-6</td><td></td></tr><tr><td>BD BBL 脱纤维羊血&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11947</td><td></td></tr><tr><td>BD Difco 琼脂&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0145-17-0</td><td></td></tr><tr><td>BD Difco LB 肉汤</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0446-17-3</td><td></td></tr><tr><td>血琼脂（添加绵羊血的胰蛋白酶大豆琼脂）</td><td>Fisher Scientific</td><td>R01200</td><td></td></tr><tr><td>氯化钙</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP510-500</td><td></td></tr><tr><td>羧苄青霉素</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP26481</td><td></td></tr><tr><td>过氧化氢酶&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1345-1G</td><td></td></tr><tr><td>胆固醇</td><td>Fisher Scientific</td><td>ICN10138201</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>Fisher Scientific</td><td>MP21021012</td><td></td></tr><tr><td>硫酸镁</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP213-1</td><td></td></tr><tr><td>制霉菌素</td><td>Acros Organics</td><td>AC455500050</td><td></td></tr><tr><td>磷酸氢二钾</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP363-500</td><td></td></tr><tr><td>磷酸二氢钾</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP362-500</td><td></td></tr><tr><td>叠氮化钠</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S2002-25G</td><td></td></tr><tr><td>氯化钠&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-1</td><td></td></tr><tr><td>氢氧化钠</td><td>Fisher Scientific</td><td>SS266-1</td><td></td></tr><tr><td>8.25% 次氯酸钠</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>磷酸氢二钠&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP332-500</td><td></td></tr><tr><td>硫酸链霉素&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP910-50</td><td></td></tr><tr><td>四环素</td><td>Sigma Aldrich</td><td>87128-25G</td><td></td></tr><tr><td>(&amp;minus;盐酸左旋咪唑</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L9756</td><td></td></tr><tr><td>酵母提取物</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1422-500&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>&lt;强&gt;耗材&amp;nbsp;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 mL 圆锥形无菌聚丙烯离心管&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-269</td><td></td></tr><tr><td>一次性聚苯乙烯刻度吸管 10 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-574</td><td></td></tr><tr><td>一次性聚苯乙烯刻度吸管 25 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-575</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 细菌培养皿（带盖，35 mm × 10 mm）</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-100A</td><td></td></tr><tr><td>1.5号&amp;nbsp; 18 mm × 18 mm 盖玻片</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541A</td><td></td></tr><tr><td>直径60 mm、高15 mm、带透明盖的培养皿</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713A</td><td></td></tr><tr><td>带透明盖的培养皿（100 mm × 15 mm）</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>普通载玻片（75 mm × 25 mm）</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-4</td><td></td></tr><tr><td>&lt;强&gt;软件&amp;nbsp;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prism</td><td>Graphpad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;强&gt;细菌菌株&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;S. oralis&lt;/em&gt; ATCC 35037</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;S. mitis&lt;/em&gt; ATCC 49456</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;S. gordonii&lt;/em&gt; DL1 查利斯&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;E. coli&lt;/em&gt; OP50</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;E. coli&lt;/em&gt; HT115</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;强&gt;线虫品系&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;强&gt;菌株&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;基因型&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;转基因&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;来源&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>N2</td><td>秀丽隐杆线虫野生分离株</td><td></td><td>CGC</td></tr><tr><td>EU1</td><td>skn-1(zu67) IV/nT1 [unc-?(n754) let-?] (IV;V)</td><td></td><td>CGC</td></tr><tr><td>LD002</td><td>IdIs1</td><td>SKN-1B/C::GFP + rol-6(su1006)</td><td>Keith Blackwell</td></tr></tbody></table>

研究缓症链球菌群在秀丽隐杆线虫中引起的氧化应激

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans），一种自由生活的线虫，已成为研究宿主-病原体相互作用的优选模型。本方案利用该模型通过H的产生来测定草绿色链球菌群的致病性2O2米提斯链球菌群是一种新兴的致病菌，可引起多种人类疾病，如菌血症、心内膜炎和眶周蜂窝织炎。本文所述方案用于测定这些线虫在H作用下的存活情况2O2 由该类病原体产生的。利用该基因 skn-1 编码氧化应激反应转录因子，表明该模型对于鉴定抵抗链球菌感染所必需的宿主基因具有重要意义。此外，通过一种转基因报告线虫品系可监测在这些病原体存在下氧化应激反应的激活情况，其中SKN-1与绿色荧光蛋白（GFP）融合。这些检测方法为研究H的氧化应激反应提供了机会2O2 来源于生物源，而非外源添加的活性氧（ROS）来源。

与 S. mutans、S. salivarius 以及非致病性 E. coli OP50 相比，S. mitis、S. oralis 和 S. gordonii 这些属于缓症链球菌组（mitis group）的细菌能迅速杀死线虫（图3A）。S. mitis、S. oralis 和 S. gordonii 组的中位生存时间分别为 300 分钟、300 分钟和 345 分钟。为确定杀伤作用是否由 H2O2 介导，在 THY 琼脂中添加了过氧化氢酶（catalase）。在存在过氧化氢酶的情况下，线虫的死亡被完全抑制（图3B）。为进一步验证链球菌产生的 H2O...

线虫Caenorhabditis elegans是研究宿主-病原体相互作用的理想模型。本文介绍了一种利用草绿色链球菌群成员感染线虫，并检测其对由此类生物产生的H2O2所引发的氧化应激反应激活情况的实验方案。

秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans，C. elegans）是一种自由生活的线虫，已成为研究宿主-病原体相互作用的有力模型。本文所述……

在本实验方案中，我们演示了如何利用自由生活的秀丽隐杆线虫（c. elegans）来阐明由米提斯链球菌群（Mitis Group streptococci）产生的过氧化氢所引起的致病性。该技术的主要优势在于，我们可以利用一种可持续的生物来源活性氧，而非化学来源，来研究线虫中的致病性以及应激反应的激活。配制一升培养基时，向一个2升的锥形瓶（Erlin Myer flask）中加入30 g Todd Hewitt培养基粉末、2 g酵母提取物和20 g琼脂。向烧瓶中的内容物加入 970 ml 去离子水，并放入一个搅拌子。用铝箔覆盖瓶口。在 121 摄氏度温度和 15 磅每平方英寸压力下，对烧瓶中的培养基进行高压灭菌 30 分钟。随后将烧瓶置于搅拌器上，轻轻搅拌使其冷却。在超净工作台内，将培养基倒入大小合适且无菌的培养皿中。静置培养基干燥2小时。此后，将平板储存于 4 摄氏度，可保存长达 1 个月。在准备米提斯链球菌前，将 THY 琼脂平板放入培养箱中升温至 37 摄氏度。然后使用无菌接种环将目标链球菌菌株在平板上划线接种。然后将平板放入烛缸中，在37摄氏度下培养约18小时，以提供微需氧环境。次日，从烛缸中取出平板，用无菌接种环挑取单个菌落，接种于含有2 ml THY液体培养基的15 ml无菌锥形管中。盖紧管盖，在37摄氏度下静置培养试管。将THY平板预先在培养箱中温育至37摄氏度，然后在THY平板上加入50微升含有1000单位过氧化氢酶的溶液。使用无菌涂布棒将过氧化氢酶溶液涂布均匀，并将平板置于超净工作台中干燥30分钟。接种链球菌菌株时，使用移液器将80 µL过夜培养的菌液加入平板中，并用无菌涂布棒将细菌在琼脂表面充分涂布均匀。将平板置于烛缸中，于37 °C培养过夜。作为对照，在两个NGM平板上各加入80 µL过夜培养的大肠杆菌OP-50菌液进行接种。将平板在37摄氏度下孵育过夜。第二天，从蜡烛罐中取出平板，并让平板冷却至室温。使用无菌线虫挑取工具，将30只L4期幼虫从NGM饲喂平板转移至接种了链球菌的THY平板上。将培养皿置于 25 摄氏度下孵育。在解剖显微镜下，于多个时间点计数每块培养皿中存活和死亡的 L4 幼虫数量。使用无菌线虫挑取工具轻轻触碰线虫，以判断其存活状态。最初每30分钟对线虫进行一次存活或死亡评分。当线虫开始快速死亡时，改为每15分钟评分一次。该检测通常需要5至6小时完成。此后，再重复实验两次。制备琼脂糖垫时，沿两条载玻片的长度方向粘贴实验室胶带。这将决定琼脂糖垫的厚度。将一块干净的载玻片置于两块用胶带固定的载玻片之间。用去离子水配制2%（重量/体积）的琼脂糖溶液，并在微波炉中加热溶解。使用移液器吸取100 µL熔融琼脂糖，滴加在干净载玻片的中央。立即在融化的琼脂糖上放置另一张干净的载玻片，并轻轻按压以制成垫片。待琼脂糖凝固后，移去上方的载玻片。琼脂糖垫片即可用于后续实验。将THY平板预热至37摄氏度。按照之前生存实验的方法，用链球菌菌株接种平板。用大肠杆菌OP50接种3块NGM平板作为对照，并在37摄氏度下过夜培养。第二天，将培养皿冷却至室温。用 M9W 缓冲液将 L4 期幼虫从 NGM 或 NGM RNAi 诱导培养皿上冲洗至 15 ml 一次性离心管中。在离心机中以 450 × g 离心 1 分钟。将上清液倾出，向每支试管中加入 10 ml M9W。重复离心步骤三次。用 250 µL M9W 重悬线虫，并取三滴 5 µL 的线虫悬液滴加到洁净的培养皿盖上。在解剖显微镜下，估算每微升中的线虫数量。使用移液器，将约100条L4期幼虫分别加入THY链球菌接种的平板和NGM大肠杆菌接种的平板中。每种细菌菌株使用三个平板。将培养板在25摄氏度下孵育2至3小时。随后从孵育箱中取出培养板，用M9W洗涤，并将线虫收集至15 ml锥形管中。将蠕虫按照之前离心步骤的方法清洗三次。用移液法吸除大部分M9W。然后向蠕虫沉淀中加入500微升含有2毫摩尔叠氮化钠或盐酸四咪唑的M9W，以进行麻醉。将含有线虫沉淀的离心管在室温下孵育15分钟。随后，取15微升线虫悬浮液滴加到预先制备好的琼脂糖垫上。在荧光显微镜下，使用Fitzy和Dappy滤光片观察skn-1的定位情况。以10倍和20倍放大倍数对线虫进行成像。根据定位程度分为三个等级进行评分：低水平定位，即未观察到细胞核定位；中等水平定位，表现为SKN-1 BCGFP出现在线虫的前端或后端；高水平定位，即在所有肠细胞中均观察到skn-1 BCGFP的细胞核定位。在本实验中，Mitis组成员迅速杀死了线虫，而与之相反的是，S.mutans、S.salivarius以及非致病性大肠杆菌E.coli OP-50则未表现出此效应。当在THY培养基中添加过氧化氢酶后，线虫的杀灭作用被消除。与野生型和互补菌株相比，在delta spxB突变株上未观察到线虫死亡。这些数据表明，米提斯群（Mitis Group）产生的过氧化氢介导了线虫的杀灭作用。与载体对照处理的线虫相比，skn-1 沉默线虫的存活率显著下降。在 skn-1 突变株和 N2 野生型线虫中也观察到类似的杀伤表型。这表明 skn-1 影响线虫在 Mitis Group 上的存活能力。在暴露于野生型 N-互补菌株的线虫中观察到 skn-1 BCGFP 的定位，而在 S. cordonae 的 Delta spxB 突变菌株处理下未观察到该定位。当敲低 P38 MAP 激酶通路组分后，与载体对照处理的线虫相比，敲低处理的线虫中 skn-1 BCGFP 的定位减少。通过使用链球菌 c.在线虫系统中，可进一步研究过氧化氢对内质网应激、线粒体损伤、线粒体自噬以及自噬的影响。此外，还可阐明过氧化氢作为促衰老因子通过破坏细胞核心过程来引发免疫反应的作用机制。

studying-oxidative-stress-caused-mitis-group-streptococci

Research

科研

JoVE Journal

Developmental Biology

发育生物学

线虫中耳炎群链球菌引起氧化应激的研究

本文描述了通过气相色谱-质谱联用技术对线虫Caenorhabditis...

稳定同位素示踪分析在发育期与成年期中间代谢流中的应用 秀丽隐杆线虫

本文描述了一种基于液体培养和分配表达荧光报告蛋白的C. elegans菌株的方法，该方法无需昂贵的分选设备。该策略可应用于多种可诱导的C.

使用荧光标记的 C. elegans 菌株进行高通量筛选与生物传感

来源：Naji, A., 等. 研究缓症链球菌群在秀丽隐杆线虫中引起的氧化应激.J. Vis. Exp. (2019).本视频演示了在微需氧条件下使用含酵母提取物的托德-休伊特（Todd-Hewitt Yeast Extract，THY）琼脂培养基培养Streptococcus...

用于宿主-病原体相互作用研究的Streptococcus mitis培养物制备

来源： Naji, A., 等研究由Mitis群引起的氧化应激 链球菌 在 秀丽隐杆线虫. 视频实验杂志 (2019)本视频展示了利用表达绿色荧光蛋白标记的SKN-1的秀丽隐杆线虫（C. elegans），通过检测绿色荧光来监测氧化应激水平。将线虫暴露于 S. gordonii 显示强烈的核荧光，证实病原体诱导的应激反应，而饲喂的 E. coli...

利用GFP标记的SKN-1可视化病原体诱导的C. elegans氧化应激

C. elegans 是研究参与氧化应激抵抗的信号转导通路的一种理想模式生物。本文提供了一种在液体环境中利用96孔板和多种氧化剂测定 C. elegans...

在96孔微孔板中测量秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）的氧化应激抗性

本方案描述了一种在固体培养基上大规模培养秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis...

基于平板的大规模培养 秀丽隐杆线虫糖尿病代谢改变研究的样本制备

持久性化学物质的跨代和多代效应对于评估其对环境和人类健康的长期影响至关重要。我们提供了利用自由生活的线虫Caenorhabditis...

使用 Caenorhabditis elegans 研究毒物的跨代与多代效应

本方案描述了如何测量秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis...

测量细菌和化学物质对肠道通透性的影响 秀丽隐杆线虫

本文通过检测荧光转录报告基因的激活以及生物体对生理应激的敏感性，对线虫C.

生理应激反应的测量 秀丽隐杆线虫

微孢子虫寄生虫Nematocida parisii感染Caenorhabditis...

研究微孢子虫感染的 Caenorhabditis elegans 模型中的遗传免疫

肠道微生物可能对宿主的健康产生正面或负面的影响 通过 特异性或保守性机制 秀丽隐杆线虫 是一种用于筛选此类微生物的便捷平台。本实验方案描述了对48种细菌分离株进行高通量筛选，以评估其对线虫应激抗性的影响，该指标被用作线虫健康状况的替代参数。...

高通量筛选影响微生物分离物 秀丽隐杆线虫 健康

了解利用秀丽隐杆线虫研究中耳炎群链球菌产生过氧化氢诱导氧化应激反应的实验方法。该技术使用生物活性氧源可持续地研究宿主-病原体相互作用及应激反应激活机制。

研究缓症链球菌群在秀丽隐杆线虫中引起的氧化应激

探索更多视频