Single-Step Enrichment of a TAP-Tagged Histone Deacetylase of the Filamentous Fungus <em>Aspergillus nidulans</em> for Enzymatic Activity Assay

Ingo Bauer; Angelo Pidroni; &#214;zg&#252;r Bayram; Gerald Brosch; Stefan Graessle

doi:10.3791/59527

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Arricchimento in un solo passaggio di un istone deacetilasi con tag TAP del fungo filamentoso Aspergillus nidulans per il saggio di attività enzimatica

JoVE 신문
생화학

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JoVE 신문 생화학

Single-Step Enrichment of a TAP-Tagged Histone Deacetylase of the Filamentous Fungus Aspergillus nidulans for Enzymatic Activity Assay

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Arricchimento in un solo passaggio di un istone deacetilasi con tag TAP del fungo filamentoso Aspergillus nidulans per il saggio di attività enzimatica

DOI:

10.3791/59527-v

•

09:07 min

•

May 01, 2019

•

Ingo Bauer, Angelo Pidroni, Özgür Bayram³, Gerald Brosch, Stefan Graessle

¹Division of Molecular Biology, Biocenter,Medical University of Innsbruck, ²Biology Department,Maynooth University, ³Maynooth University Human Health Research Institute

Chapters

00:04Title
00:53Inoculum Preparation
01:34Growth and Harvesting of Mycelia
02:36Preparation of the Protein Extract and Equilibration of the IgG Resin
04:40Batch Purification of TAP-tagged HDAC
06:50Results: Analysis of the Purification and Enzymatic Activity Assay
08:29Conclusion

Summary

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Gli istoni di classe 1 (HDACs) come gli RpdA hanno acquisito importanza come potenziali bersagli per il trattamento delle infezioni fungine. Qui presentiamo un protocollo per l'arricchimento specifico di RpdA con tag TAP, combinato con un test di attività HDAC che consente test di efficacia in vitro degli inibitori dell'istone deacetilasi.

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