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Ensaios de atividade com base em RMN para determinação da inibição de compostos, valores de IC50 , atividade Artifactual e atividade de células inteiras de Ribohidrolases nucleósidos
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JoVE 신문 화학
NMR-Based Activity Assays for Determining Compound Inhibition, IC50 Values, Artifactual Activity, and Whole-Cell Activity of Nucleoside Ribohydrolases

Ensaios de atividade com base em RMN para determinação da inibição de compostos, valores de IC50 , atividade Artifactual e atividade de células inteiras de Ribohidrolases nucleósidos

DOI:
10.3791/59928-v

•

10:24 min

•

June 30, 2019

•

, , , , , , , , , , ,
1Department of Chemistry,Adelphi University, 2Department of Chemistry,Washington University in St. Louis, 3Department of Chemistry,Boston University

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:59Initial Test Compound Assay
  • 05:01Detergent Counter Screen Assay
  • 06:19Jump-Dilution Counter Screen Assays
  • 07:56Results: Representative Nuclear Magnetic Resonance (NMR)-Based Assay Results
  • 09:28Conclusion

Summary

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Foram desenvolvidos ensaios de atividade com base em RMN para identificar e caracterizar inibidores de duas enzimas de riboidrolase nucleósidas. Os protocolos são fornecidos para ensaios compostos iniciais em 500 μM e 250 μM, ensaios de dose-resposta para a determinação de valores de IC50 , ensaios de tela de contador de detergente, ensaios de tela de contador de diluição de salto e ensaios em células inteiras de e. coli .

Tags

NMR-based Activity AssaysEnzyme InhibitionIC50 ValuesArtifact DetectionWhole-cell ActivityNucleoside RibohydrolasesFragment ScreeningTrichomonas VaginalisAnti-trichomonal DrugsReagent VolumesReaction ComponentsSubstrate PreparationTest Compound PreparationReaction Stock SolutionReaction InitiationReaction Quenching

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