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Chapters
- 00:04Title
- 00:29Insertion of Peptide Coding Sequencing Sequence in pBAD BirA-eCPX-AP
- 01:32Generation of a BirA Library
- 03:16Selection of Bacteria Expressing Biotinylated Peptide
- 07:18Quantification of Enrichment
- 08:26Results: Model Selection with pBAD-BirA-eCPX-AP and pBAD-BirA-eCPX-AP(K10A)
- 10:00Conclusion
Hier stellen wir eine Methode zur Auswahl neuartiger Varianten der E. coli-Biotin-Proteinligase BirA vor, die ein bestimmtes Zielpeptid biotinylatiert. Das Protokoll beschreibt die Konstruktion eines Plasmids zur bakteriellen Darstellung des Zielpeptids, die Erzeugung einer BirA-Bibliothek, die Auswahl und Charakterisierung von BirA-Varianten.
