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Produção de conjuntos de motor de dynein e de Kinesin em nanostructures do ADN origami para a única observação da molécula
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JoVE 신문 생화학
Production of Dynein and Kinesin Motor Ensembles on DNA Origami Nanostructures for Single Molecule Observation

Produção de conjuntos de motor de dynein e de Kinesin em nanostructures do ADN origami para a única observação da molécula

DOI:
10.3791/60369-v

•

08:09 min

•

October 15, 2019

•

,
1Department of Biological Sciences,Smith College, 2Center for Microscopy and Imaging,Smith College

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:46Galactose-Induced Motor Protein Growth, Expression, and Harvesting
  • 01:39Cell Lysis and Soluble Protein Extraction
  • 02:36IgG Affinity Purification
  • 03:17DNA Oligonucleotide Labeling and TEV Cleavage
  • 04:50Chassis Purification
  • 05:56Results: Representative Motor Ensemble Production
  • 07:26Conclusion

Summary

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O objetivo deste protocolo é formar conjuntos de motores moleculares em nanoestruturas de DNA origami e observar a motilidade do conjunto usando microscopia de fluorescência de reflexão interna total.

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Keywords: DNA OrigamiCytoskeletal Motor ProteinsDyneinKinesinMyosinCargo TransportSingle Molecule ObservationYeast ExpressionProtein PurificationIgG Affinity Purification

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