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Dinámica de oligomerización de receptores de superficie celular en células vivas mediante la microscopía de fluorescencia de reflexión interna total combinada con análisis de número y brillo
JoVE 신문
생물학
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JoVE 신문 생물학
Oligomerization Dynamics of Cell Surface Receptors in Living Cells by Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy Combined with Number and Brightness Analysis
DOI:

10:43 min

November 06, 2019

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Chapters

  • 00:04Title
  • 01:48Sample Preparation
  • 02:38TIRF Imaging: Alignment of the Laser Line and Optimization of TIRF Illumination
  • 04:05TIRF Imaging: Capture of the Time Series
  • 05:46Number & Brightness (N&B): Quality Check of the Time Series
  • 06:34Number & Brightness (N&B): Computation of the B-values in Selected Region-of-interest (ROI)
  • 08:19Results: N&B Analysis and Kinetics of FGFR1 Oligomerization
  • 09:42Conclusion

Summary

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Describimos un enfoque de imagen para la determinación del estado oligomérico promedio de los oligómeros receptores etiquetados con mEGFP inducidos por la unión de ligandos en la membrana plasmática de las células vivas. El protocolo se basa en la microscopía de Fluorescencia de Reflexión Interna Total (TIRF) combinada con el análisis Número y Brillo (N&B).

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