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Flux de spectrométrie de masse d'immunoprécipitation sans étiquette pour le profilage de l'interaction nucléaire à grande échelle
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling
DOI:

11:19 min

November 17, 2019

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Chapters

  • 00:04Title
  • 01:07Preparation of Nuclear Extract
  • 03:45Immunoprecipitation of Endogenous Nuclear Bait Protein
  • 07:01Sample Preparation and LC/MS System Suitability
  • 09:09Results: A Single-bait Single-antibody IP-MS Experiment
  • 10:25Conclusion

Summary

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Décrit est un workflow protéomique pour identifier des partenaires d'interaction de protéine d'une fraction subcellulaire nucléaire utilisant l'enrichissement d'immunoaffinité d'une protéine donnée d'intérêt et de la spectrométrie de masse sans étiquette. Le flux de travail comprend la fractionnement subcellulaire, l'immunoprécipitation, la préparation de l'échantillon assisté par filtre, le nettoyage hors ligne, la spectrométrie de masse et un pipeline de bioinformatique en aval.

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