이 보고서에서는 활성화된 혈소판 풍부 혈장(PRP)을 준비하기 위한 이중 스핀 방법에 대해 설명합니다. 자가 트롬빈을 사용하여 인간 지방 유래 줄기세포(hASC)를 배양했습니다. 활성화된 PRP는 hASC의 증식을 촉진하는 것으로 나타났습니다.
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이 보고서에서는 활성화된 혈소판 풍부 혈장(PRP)을 준비하기 위한 이중 스핀 방법에 대해 설명합니다. 자가 트롬빈을 사용하여 인간 지방 유래 줄기세포(hASC)를 배양했습니다. 활성화된 PRP는 hASC의 증식을 촉진하는 것으로 나타났습니다.
원심분리를 통해 전혈에서 제조한 활성 혈소판 풍부 혈장(PRP)은 여러 종류의 배양 세포에서 증식 자극 효과를 입증하여 재생 의학에 사용할 수 있음을 시사했습니다. 여기에서는 전혈에서 PRP를 준비하기 위해 이중 스핀 방법을 사용했습니다. PRP는 자가 트롬빈에 의해 추가로 활성화되었습니다. 활성화된 PRP에서 혈소판 수를 측정하고 인간 지방 유래 줄기세포(hASC)의 증식 자극 효과를 조사했습니다. 그 결과 PRP에서 혈소판 수치가 전혈장보다 11.5배 더 높았습니다. hASC의 증식은 1% PRP를 사용한 배양에 의해 현저하게 향상되었습니다. 설명된 방법을 사용하여 고농도의 혈소판으로 PRP를 재현성 있게 준비할 수 있습니다. 이 방법으로 제조된 PRP는 hASC의 증식을 현저하게 촉진합니다.
활성 혈소판 풍부 혈장(PRP)은 전혈의 원심분리에 의해 준비되며 기준선 수준1보다 훨씬 높은 혈소판을 포함하는 것으로 나타났습니다. 자가 RPP는 상처 치유2, 뼈 손상3, 미용 수술 4,5 등 외과적 치료에 널리 사용되어 왔습니다. PRP에서 혈소판이 활성화된 후 혈소판에 존재하는 α-과립은 혈소판 유래 성장 인자(PDGF), 표피 성장 인자(EGF), 인슐린 유사 성장 인자(IGF), 형질 성장 인자 베타(TGF-β), 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 등과 같은 여러 성장 인자를 방출합니다 1,6,7. 이러한 성장 인자는 세포 증식(cell proliferation)8, 이동(migration)9, 분화(differentiation
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이 연구는 1975년 헬싱키 선언의 윤리 지침에 따라 간사이 의과대학의 윤리 검토 위원회의 승인을 받았습니다. 모든 표본은 기증자의 사전 동의하에 수집되어 사용되었습니다.
1. 준비
2. 채혈
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PRP에서 혈소판 및 PDGF-BB의 농축 농도
PRP에서 혈소판과 PDGF-BB의 농도는 각각 11.5배 및 25.9배 증가했으며, 이는 전체 혈장에서와 같았습니다. 그러나 PRP 내 EGF 농도는 변하지 않았고 IGF는 전체 혈장의 70%에 불과했습니다(표 1). 실험은 이중 스핀 방법으로 4번 반복되었습니다.
PRP 자극에 의한 hASC의 증식 강화
세포 증식은 0.2% PRP(P < 대조군 대비 0.05)로 처리함으로써 증가했으며, 1% PRP(P < 대조군 대비 0.05 및 P < 0.05 대 0.2% PRP)로 처리함으로써 더 크게 증가하였다. 그림 1A 는 hASC의 증식이 용량 의존적 방식으로 PRP에 의해 자극되었음을 보여줍니다. PRP 자극에 의한 hASC의 향상된 증식은 위상차 현미경 검사에.......
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PRP 활성화 후, PDGF, EGF, IGF, TGF-β 및 VEGF 1,6,7과 같은 여러 성장 인자는 상처 치유를 촉진하는 상처의 세포와 조직을 "활성화"합니다20,21. 미용 재건 수술의 경우, 활성화된 세포가 치유를 유도하고 미관을 개선하는 것으로 나타났다22,23. 대안적으로, 인간 지방 유래 줄기 세포는 미용 및 재구성 분야에서 PRP 자극 없이 사용할 수 있습니다 24,25,26.
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저자는 경쟁하는 재정적 이해관계가 없다고 선언합니다.
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 20 mL 주사기, 테루모 주사기 잠금 타입 | 테루모, 도쿄, 일본. | SS-20LZP | |
| 50 mL 튜브, 폴리프로필렌 원뿔형 튜브 | 코닝, 뉴욕, 미국. | 352070 | |
| 자동 혈액 시스템 | Sysmex Corp., Tokyo, Japan | XE-2100 | |
| 채혈 바늘, SafeTouch PSV 세트(루어 어댑터 포함), 21G x 3/4" | Nipro, 오사카, 일본. | 32-384 | |
| 채혈 튜브, ACD 용액 A 채혈 튜브, 8.5mL | BD Vacutainer, NJ, USA. | ||
| 채혈 튜브, 혈청 채혈 튜브/모노벳, 10mL | BD Vacutainer, NJ, USA. | 366430 | |
| 염화칼슘, 1 mEq/mL, | 오츠카 제약 공장, 도쿠시마, 일본. | 3215400A1061 | |
| 캐뉼라, BS 비베벨 바늘, 18G(1.2mm) x 75mm | BS Medical, 도쿄, 일본. | BS-81007 | 비sale |
| 세포 계수 키트-8 | Dojindo Molecular Technologies, 구마모토, 일본 | CK04 | |
| 원심분리기 | Kokusan, Tokyo, Japan. | H-19F | |
| 원심분리기 | 에펜도르프, 함부르크, 독일. | 5415R | |
| EnSpire 2300 다중 라벨 리더 | PerkinElmer, Inc., Waltham, MA, USA | ||
| 필터 유닛 | Merck Millipore, Co. Cork, Ireland. | ||
| Human EGF Quantikine ELISA Kit | R& D 시스템, 미국 미네소타주 미니애폴리스 | DEG00 | |
| 인간 IGF-I 퀀티킨 ELISA 키트 | R& D 시스템, 미국 미네소타주 미니애폴리스 | DG100 | |
| 인간 PDGF-BB 퀀티킨 ELISA 키트 | R& D Systems, 미국 미네소타주 미니애폴리스 | DBB00 | |
| 피펫 팁, ART 1000 리치 배리어 팁 | Thermo Scientific, MA, USA. | 2079-05-HR | |
| 피펫, Nichipet EXII 100-1000 μ L | Nichiryo, 사이타마, 일본. | 00-NPX2-1000 | |
| 스털링 니트릴 무동력 검사 장갑 | Kimberly-Clark | 50707 | |
| 소독용 Yamazen 알코올 | Yamazen Pharmaceutical, 오사카, 일본. | A7L07 |
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