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インビトロとプランタにおけるRING型E3ユビキチンリガーゼの機能特性評価

JoVE 신문
생화학

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JoVE 신문 생화학

Functional Characterization of RING-Type E3 Ubiquitin Ligases In Vitro and In Planta

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インビトロとプランタにおけるRING型E3ユビキチンリガーゼの機能特性評価

DOI:

10.3791/60533-v

•

10:27 min

•

December 05, 2019

•

Joanna Kud, Wenjie Wang, Yulin Yuan, Allan Caplan, Joseph C. Kuhl, Louise-Marie Dandurand, Fangming Xiao

¹Department of Entomology, Plant Pathology and Nematology,University of Idaho, ²Department of Plant Sciences,University of Idaho

Chapters

00:04Title
01:04Site-directed Mutagenesis
02:29Recombinant Protein Purification and In Vitro Ubiquitination Assay
03:40Agrobacterium-mediated Transient Protein Expression in Nicotiana benthamiana Leaves and In Planta Ubiquitination Assay
06:36Establishing the Link Between Enzymatic Activity and Function In Planta
07:27Results: In Vitro and In Planta Ubiquitination Assay
09:20Conclusion

Summary

자동 번역

この原稿の目的は、RING型E3ユビキチンリガーゼの包括的な生化学的および機能的研究の概要を提示することです。このマルチステップパイプラインは、詳細なプロトコルを用いて、試験されたタンパク質の酵素活性を検証し、活性を機能にリンクする方法を示す。

Tags

Keywords: RING-type E3 Ubiquitin Ligases Site-directed Mutagenesis In Vitro Enzymatic Activity In Planta Functionality Ubiquitination Assay RING Domain Cys And His Residues PCR Dpn1 Digestion PMAL-c2 Vector MBP Tag SDS-PAGE PVDF Membrane Western Blotting

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