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Identificação de reguladores de fatores de transcrição usando triagem de média-duração de bibliotecas arrayed e um repórter baseado em dupla-luciferase
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JoVE 신문 암 연구학
Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

Identificação de reguladores de fatores de transcrição usando triagem de média-duração de bibliotecas arrayed e um repórter baseado em dupla-luciferase

DOI:
10.3791/60582-v

•

11:32 min

•

March 27, 2020

•

,
1Department of Molecular & Cellular Physiology,Albany Medical College

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:39Lentiviral Vector Library Preparation
  • 01:24Packaging of the Arrayed Lentiviral Library
  • 03:35Cell Infection for Screening
  • 04:48Cell Seeding for Transfection of Dual-Luciferase Reporter
  • 06:27Dual-Luciferase Reporter Transfection
  • 07:35Dual-Luciferase Activity Quantification
  • 09:02Results: Representative Arrayed Library Screening
  • 10:47Conclusion

Summary

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Para identificar novos reguladores de fatores de transcrição, desenvolvemos uma abordagem para tela de bibliotecas RNAi lentivirais ou retrovirais usando um ensaio de repórter transcricional baseado em dupla luciferase. Esta abordagem oferece uma maneira rápida e relativamente barata de selecionar centenas de candidatos em um único experimento.

Tags

Transcription FactorMedium-throughput ScreeningArrayed LibrariesDual-luciferase ReporterLentiviral VectorRetroviral AssayBacterial Miniprep293FT CellsTransfectionPsPAX2VSVGCell Culture

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