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Journal
/
생화학
/
视觉GPCR-迷你G蛋白信号复合物的战略筛选与表征,成功结晶
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문
생화학
Strategic Screening and Characterization of the Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex for Successful Crystallization
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Click here for the English version.
视觉GPCR-迷你G蛋白信号复合物的战略筛选与表征,成功结晶
DOI:
10.3791/60747-v
•
09:19 min
•
March 16, 2020
•
Filip Pamula
2
,
Jonas Mühle
,
Alain Blanc
,
Rony Nehmé
,
Patricia C. Edwards
,
Christopher G. Tate
,
Ching-Ju Tsai
1
Laboratory of Biomolecular Research
,
Paul Scherrer Institute
,
2
Department of Biology
,
ETH Zürich
,
3
Center for Radiopharmaceutical Sciences
,
Paul Scherrer Institute
,
4
Laboratory of Molecular Biology
,
Medical Research Council
Chapters
00:04
Introduction
00:45
Cell Membrane Solubilization and Protein Extraction
03:53
UV-VIS Spectroscopy
04:33
Automated Size-Exclusion Chromatography of Rhodopsin and Rhodopsin Mini-Go Complex
06:04
Deglycosylation
06:44
Results: UV-VIS Spectroscopy, SEC, and SDS-PAGE
08:34
Conclusion
Summary
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本报告描述了不同的洗涤剂的筛选,以准备视觉GPCR,红蛋白,其复合与微型G
o。
演示了在纯化过程中不同阶段对复杂质量进行特征的生化方法。该协议可以推广为其他膜蛋白复合物,用于其未来的结构研究。
Tags
Keywords: GPCR
Mini-G Protein
Signal Transduction
Membrane Protein Complex
Detergent Screening
Crystallization
HEK293 Cells
Affinity Purification
9-cis Retinal
Buffer Exchange
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