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Strategisches Screening und Charakterisierung des Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex für eine erfolgreiche Kristallisation
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JoVE 신문 생화학
Strategic Screening and Characterization of the Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex for Successful Crystallization
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Strategisches Screening und Charakterisierung des Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex für eine erfolgreiche Kristallisation

DOI:
10.3791/60747-v

•

09:19 min

•

March 16, 2020

•

, , , , , ,
1Laboratory of Biomolecular Research,Paul Scherrer Institute, 2Department of Biology,ETH Zürich, 3Center for Radiopharmaceutical Sciences,Paul Scherrer Institute, 4Laboratory of Molecular Biology,Medical Research Council

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:45Cell Membrane Solubilization and Protein Extraction
  • 03:53UV-VIS Spectroscopy
  • 04:33Automated Size-Exclusion Chromatography of Rhodopsin and Rhodopsin Mini-Go Complex
  • 06:04Deglycosylation
  • 06:44Results: UV-VIS Spectroscopy, SEC, and SDS-PAGE
  • 08:34Conclusion

Summary

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Dieser Bericht beschreibt das Screening verschiedener Reinigungsmittel zur Herstellung des visuellen GPCR, Rhodopsins und seines Komplexes mit Mini-Go. Gezeigt werden biochemische Methoden, die die Qualität des Komplexes in verschiedenen Stadien während der Reinigung charakterisieren. Dieses Protokoll kann für ihre zukünftigen Strukturstudien auf andere Membranproteinkomplexe verallgemeinert werden.

Tags

Keywords: GPCRMini-G ProteinSignal TransductionMembrane Protein ComplexDetergent ScreeningCrystallizationHEK293 CellsAffinity Purification9-cis RetinalBuffer Exchange

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