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Parallele Vernehmung der Rekrutierung von '-Arrestin2 für Ligand Screening auf einer GPCR-weiten Skala mit PRESTO-Tango Assay
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Parallel Interrogation of β-Arrestin2 Recruitment for Ligand Screening on a GPCR-Wide Scale using PRESTO-Tango Assay
DOI:

09:03 min

March 10, 2020

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Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:43Primary Screening: Poly-L-Lysine Plate Preparation
  • 01:25Primary Screening: Cell Culture and Plate Seeding
  • 02:22Primary Screening: DNA Plate Preparation and Transfections
  • 03:35Primary Screening: Cell Stimulation and Luminescence Reading
  • 04:26Secondary Screening: Cell Seeding and Transfections
  • 05:59Secondary Screening: Half Log Dose-Curve Drug Plate Preparation and Luminescence Reading
  • 07:16Results: Representative Primary Screening Hit Identification and Secondary Screening Dose-Curve Responses
  • 08:23Conclusion

Summary

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Da GPCRs attraktive arzneimittelfähige Ziele sind, ist das GPCR-Ligandenscreening daher für die Identifizierung von Bleiverbindungen und für Deorphanisierungsstudien unerlässlich. Im Rahmen dieser Bemühungen beschreiben wir PRESTO-Tango, eine Open-Source-Ressourcenplattform, die für die gleichzeitige Profilierung der vorübergehenden Rekrutierung von "Arrestin2" bei ca. 300 GPCRs mit einem TEV-basierten Reportertest verwendet wird.

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