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면역학 및 감염병학
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Bestimmung der chemischen Inhibitor-Effizienz gegen intrazelluläre toxoplasma Gondii Wachstum mit einem Luziferase-basierten Wachstumstest
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JoVE 신문 면역학 및 감염병학
Determination of Chemical Inhibitor Efficiency against Intracellular Toxoplasma Gondii Growth Using a Luciferase-Based Growth Assay
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Bestimmung der chemischen Inhibitor-Effizienz gegen intrazelluläre toxoplasma Gondii Wachstum mit einem Luziferase-basierten Wachstumstest

DOI:
10.3791/60985-v

•

09:49 min

•

April 29, 2020

•

, , , , ,
1Department of Biological Sciences,Clemson University, 2Eukaryotic Pathogens Innovation Center,Clemson University

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:49Luciferase-Based ToxoplasmaGrowth Assay
  • 02:25Chemical Compound Inhibition Efficacy Evaluation
  • 04:08CRISPR-Cas9-Based Gene Deletion
  • 05:59Toxoplasma Transfection
  • 06:51Knockout Parasite Cloning
  • 08:06Results: Representative LHVS Inhibition Efficacy Against Intracellular Toxoplasma Growth
  • 09:22Conclusion

Summary

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Präsentiert hier ist ein Protokoll zur Bewertung der Hemmungswirksamkeit chemischer Verbindungen gegen in vitro intrazelluläres Wachstum von Toxoplasma gondii mit einem luziferase-basierten Wachstumstest. Die Technik wird verwendet, um die Hemmungsssspezifität durch genetische Deletion des entsprechenden Zielgens zu bestätigen. Die Hemmung von LHVS gegen TgCPL-Protease wird als Beispiel bewertet.

Tags

Keywords: Toxoplasma GondiiLuciferase-based Growth AssayChemical InhibitorDrug TargetCRISPR-Cas9Intracellular PathogenHigh-throughput ScreeningParasite Doubling TimeHuman Foreskin FibroblastsLuciferase SubstrateMicroplate ReaderNormalized Fold-changeLinear Regression

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