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Sondare la cinetica dell'mRNA nello spazio e nel tempo in Escherichia coli utilizzando la fluorescenza a singola molecola a due colori in ibridazione situ
JoVE 신문
생물학
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JoVE 신문 생물학
Probing mRNA Kinetics in Space and Time in Escherichia coli using Two-Color Single-Molecule Fluorescence In Situ Hybridization
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Sondare la cinetica dell'mRNA nello spazio e nel tempo in Escherichia coli utilizzando la fluorescenza a singola molecola a due colori in ibridazione situ

DOI:
10.3791/61520-v

•

10:01 min

•

July 30, 2020

•

,
1Department of Physics,University of Illinois at Urbana-Champaign, 2Center for the Physics of Living Cells,University of Illinois at Urbana-Champaign, 3Carl R. Woese Institute for Genomic Biology,University of Illinois at Urbana-Champaign, 4Center for Biophysics and Quantitative Biology,University of Illinois at Urbana-Champaign

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:42Coverslip and Glass Slide Preparation
  • 01:46Time-Course Experiment and Sample Fixation
  • 03:18Cell Membrane Permeabilization
  • 03:57Probe Hybridization
  • 04:31Imaging
  • 05:25Post-Hybridization Wash and Imaging Preparation
  • 06:20Image Analysis
  • 07:36Results: Representative mRNA Kinetic Probing Analysis
  • 09:22Conclusion

Summary

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Questo protocollo descrive un'applicazione di fluorescenza a singola molecola in ibridazione situ (smFISH) per misurare la cinetica in vivo della sintesi e della degradazione dell'mRNA.

Tags

Keywords: MRNA KineticsTwo-color Single-molecule Fluorescence In Situ Hybridization (smFISH)TranscriptionMRNA DegradationEscherichia ColiTime Course ExperimentIPTG InductionONPF RepressionCell FixationCell Permeabilization

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