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Monitoraggio in tempo reale dell'attivazione dell'aurora chinasi A utilizzando biosensori FRET conformazionali in cellule vive
JoVE 신문
생물학
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JoVE 신문 생물학
Real-Time Monitoring of Aurora kinase A Activation using Conformational FRET Biosensors in Live Cells
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Monitoraggio in tempo reale dell'attivazione dell'aurora chinasi A utilizzando biosensori FRET conformazionali in cellule vive

DOI:
10.3791/61611-v

•

06:29 min

•

July 30, 2020

•

, ,
1Univ Rennes, CNRS, IGDR (Genetics and Development Institute of Rennes), UMR 6290, F-35000 Rennes, France

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:36Donor/Acceptor Förster Resonance Energy Transfer (FRET) Pair Selection
  • 01:13Cell Synchronization
  • 01:42FRET/Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy (FLIM) Acquisitions
  • 02:50Donor/Acceptor Pair Delta Lifetime Calculation and FLIM Value Comparison
  • 03:53Results: Representative Aurora Kinase A (AURKA) FRET Biosensor and Negative Control Images
  • 05:52Conclusion

Summary

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L'attivazione della Ser/Thr chinasi multifunzionale AURKA è caratterizzata dalla sua autofosforilazione su Thr288. Le sonde fluorescenti che si basano su FRET possono discriminare tra i suoi stati inattivi e attivati. Qui, illustriamo alcune strategie per l'ingegneria della sonda, insieme a un protocollo FRET rapido per seguire l'attivazione della chinasi durante la mitosi.

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Keywords: Real-time MonitoringAurora Kinase AConformational FRET BiosensorsLive CellsFRET-FLIMFluorescent ProteinDonor-acceptor PairCell SynchronizationMicroscopyLifetime MappingMitotic Spindle

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