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Generazione di librerie di inserimento transposon in batteri Gram-Negativi per il sequenziamento ad alta velocità effettiva
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JoVE 신문 생물학
Generating Transposon Insertion Libraries in Gram-Negative Bacteria for High-Throughput Sequencing
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Generazione di librerie di inserimento transposon in batteri Gram-Negativi per il sequenziamento ad alta velocità effettiva

DOI:
10.3791/61612-v

•

08:19 min

•

July 07, 2020

•

, ,
1Department of Biology,University of Texas at Arlington

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:57Bacterial Mating
  • 02:47Generation of Final Bacterial Mutant Library
  • 04:11DNA Shearing and Poly-C Tail Addition
  • 06:23Results: Transposon Mutant Library
  • 07:31Conclusion

Summary

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Descriviamo un metodo per generare librerie mutanti trasposoni saturanti nei batteri Gram-negativi e la successiva preparazione di librerie di amplicone di DNA per il sequenziamento ad alto rendimento. Ad esempio, ci concentriamo sull'agente patogeno ESKAPE, Acinetobacter baumannii, ma questo protocollo è summostico per una vasta gamma di organismi Gram-negativi.

Tags

Transposon Insertion LibraryGram-negative BacteriaHigh-throughput SequencingEssential GenesAntibiotic ResistanceIn Vivo FitnessMechanical ShearingPoly-CTLRestriction EnzymesAdapter LigationBacterial GeneticsGenotype-phenotype RelationshipsMatingDiaminopimelic AcidGlycerolFrozen Stock

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