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Mutagénèse par PCR, clonage, expression, protocoles de purification rapide des protéines et cristallisation du type sauvage et des formes mutantes de la tryptophane synthase
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
PCR Mutagenesis, Cloning, Expression, Fast Protein Purification Protocols and Crystallization of the Wild Type and Mutant Forms of Tryptophan Synthase
DOI:

09:31 min

September 26, 2020

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Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:44Purification of Wild Type or Mutant Form of α2β2 StTS Complex
  • 03:53Optimized Crystallization for Wild Type and Mutant Form of the α2β2 StTS Comple
  • 06:49Results: Purification of the α- and β -Subunits of the Tryptophan Synthase and the Wild Type and Mutant α2β2 StTS Complexes
  • 08:50Conclusion

Summary

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Cet article présente une série de méthodes consécutives pour l’expression et la purification de Salmonella typhimurium tryptophan synthase comp ce protocole un système rapide pour purifier le complexe protéique en une journée. Les méthodes couvertes sont la mutagénèse dirigée par site, l’expression des protéines chez Escherichia coli,la chromatographie d’affinité, la chromatographie par filtration sur gel et la cristallisation.

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