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CRISPR/Cas9 Édition du gène C. elegans rbm-3.2 à l’aide du marqueur de criblage co-CRISPR dpy-10 et des complexes de ribonucléoprotéines assemblés.

JoVE 신문
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CRISPR/Cas9 Editing of the C. elegans rbm-3.2 Gene using the dpy-10 Co-CRISPR Screening Marker and Assembled Ribonucleoprotein Complexes.

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CRISPR/Cas9 Édition du gène C. elegans rbm-3.2 à l’aide du marqueur de criblage co-CRISPR dpy-10 et des complexes de ribonucléoprotéines assemblés.

DOI:

10.3791/62001-v

•

07:46 min

•

December 11, 2020

•

Amy Smith, Mary Bergwell*¹, Ellie Smith*¹, Danita Mathew*¹, Jyoti Iyer

¹Department of Chemistry and Biochemistry,The University of Tulsa

Chapters

00:04Introduction
00:53C. elegans Gonad Preparation and Microinjection
01:56Injected Worm Recovery and Transfer
02:37PickingC. elegans for Screening
03:17Single Worm Lysis and PCR
04:22Restriction Digestion and Agarose Gel Electrophoresis
05:08Identification of Positively Edited and Homozygous Edited Worms
06:01Results: Representative C. elegans rbm-3.2 Gene Editing and Screening
07:10Conclusion

Summary

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L’objectif de ce protocole est de permettre l’édition CRISPR/Cas9 transparente du génome de C. elegans en utilisant des complexes de ribonucléoprotéines assemblés et le marqueur co-CRISPR dpy-10 pour le dépistage. Ce protocole peut être utilisé pour effectuer une variété de modifications génétiques chez C. elegans, y compris des insertions, des délétions, des remplacements de gènes et des substitutions de codon.

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CRISPR/Cas9 Édition du gène C. elegans rbm-3.2 à l’aide du marqueur de criblage co-CRISPR dpy-10 et des complexes de ribonucléoprotéines assemblés.

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