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CRISPR/Cas9 Edición del gen C. elegans rbm-3.2 utilizando el marcador de detección co-CRISPR dpy-10 y complejos de ribonucleoproteína ensamblados.
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CRISPR/Cas9 Editing of the C. elegans rbm-3.2 Gene using the dpy-10 Co-CRISPR Screening Marker and Assembled Ribonucleoprotein Complexes.
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CRISPR/Cas9 Edición del gen C. elegans rbm-3.2 utilizando el marcador de detección co-CRISPR dpy-10 y complejos de ribonucleoproteína ensamblados.

DOI:
10.3791/62001-v

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07:46 min

•

December 11, 2020

•

, , , ,
1Department of Chemistry and Biochemistry,The University of Tulsa

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:53C. elegans Gonad Preparation and Microinjection
  • 01:56Injected Worm Recovery and Transfer
  • 02:37PickingC. elegans for Screening
  • 03:17Single Worm Lysis and PCR
  • 04:22Restriction Digestion and Agarose Gel Electrophoresis
  • 05:08Identification of Positively Edited and Homozygous Edited Worms
  • 06:01Results: Representative C. elegans rbm-3.2 Gene Editing and Screening
  • 07:10Conclusion

Summary

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El objetivo de este protocolo es permitir la edición CRISPR/Cas9 sin fisuras del genoma de C. elegans utilizando complejos de ribonucleoproteína ensamblados y el marcador co-CRISPR dpy-10 para el cribado. Este protocolo se puede utilizar para realizar una variedad de modificaciones genéticas en C. elegans, incluidas inserciones, deleciones, reemplazos de genes y sustituciones de codones.

Tags

CRISPR/Cas9C. ElegansRbm-3.2 GeneDpy-10 Co-CRISPRRibonucleoprotein ComplexesGenome EditingMicroinjectionRoller PhenotypeDumpy Phenotype

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