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Entrega del complejo de ribonucleoproteína Cas9/sgRNA en células inmortalizadas y primarias a través de partículas similares a virus ("nanocuchillas")
JoVE 신문
생물학
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JoVE 신문 생물학
Delivery of the Cas9/sgRNA Ribonucleoprotein Complex in Immortalized and Primary Cells via Virus-like Particles (“Nanoblades”)
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Entrega del complejo de ribonucleoproteína Cas9/sgRNA en células inmortalizadas y primarias a través de partículas similares a virus ("nanocuchillas")

DOI:
10.3791/62245-v

•

09:23 min

•

March 31, 2021

•

, , ,
1LBMC, Laboratoire de Biologie et Modélisation de la Cellule Univ Lyon, ENS de Lyon, Université Claude Bernard Lyon 1, CNRS, UMR 5239, INSERM, U1210, Lyon, 69007, France, 2CIRI, Centre International de Recherche en Infectiologie Univ Lyon, Inserm, U1111, Université Claude Bernard Lyon 1, CNRS, UMR5308, ENS de Lyon, F-69007, Lyon, France

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:56Nanoblade Preparation
  • 02:45Concentration of Nanoblades on a Sucrose-Cushion
  • 04:16Monitoring Cas9 Loading Within Nanoblades and Transduction of Cells
  • 06:24Results: Characterization of Nanoblades
  • 08:29Conclusion

Summary

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Hemos desarrollado un protocolo simple y económico para cargar complejos de ribonucleoproteína Cas9 / ARN de guía única (sgRNA) dentro de partículas similares a virus. Estas partículas, llamadas "Nanoblades", permiten la entrega eficiente del complejo Cas9/sgRNA en células inmortalizadas y primarias, así como in vivo.

Tags

Keywords: Cas9SgRNARibonucleoproteinVirus-like ParticlesNanobladesGenome EditingHEK 293T CellsTransfectionUltracentrifugationSucrose Gradient

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