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Gene Knock-in di CRISPR/Cas9 e smistamento cellulare in macrofagi e linee cellulari T
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Chapters
- 00:05Introduction
- 00:32Design and Plasmid Construction of sgRNAs Targeting Rosa26 Locus
- 02:28Design and Construction of Targeting Vector as Homologous Recombination Template
- 03:46Electroporation of Macrophage and T Cell Lines
- 07:19Cell Sorting to Isolate Putative Knock-in Cells
- 08:58Screening and Validation of Positive Knock-in Cells
- 10:16Representative Results
- 10:52Conclusion
Questo protocollo utilizza reporter fluorescenti e ordinamento cellulare per semplificare gli esperimenti knock-in in macrofagi e linee cellulari T. Per questi esperimenti di knock-in semplificati vengono utilizzati due plasmidi, vale a dire un plasmide che esprime CRISPR / Cas9 e DsRed2 e un plasmide donatore di ricombinazione omologa che esprime EBFP2, che è permanentemente integrato nel locus Rosa26 nelle cellule immunitarie.
