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体外 E3泛素连接酶功能分析
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JoVE 신문 생물학
In Vitro Analysis of E3 Ubiquitin Ligase Function
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体外 E3泛素连接酶功能分析

DOI:
10.3791/62393-v

•

06:06 min

•

May 14, 2021

•

, , ,
1Institute for Genetics and Cologne Excellence Cluster on Cellular Stress Responses in Aging Associated Diseases (CECAD),University of Cologne, 2Center for Molecular Medicine Cologne,University of Cologne

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:43In Vitro Auto-Ubiquitylation Assay
  • 01:31In vitro Substrate Ubiquitylation Assay
  • 02:13Lysine Discharge Assay
  • 03:37Results: Analysis of the Ubiquitylation Products
  • 05:28Conclusion

Summary

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本研究为分析E3泛素连接酶催化活性提供了详细的 体外 泛素化测定方案。重组蛋白使用原核系统（如 大肠 杆菌培养物）表达。

Tags

Keywords: E3 Ubiquitin LigaseIn Vitro AnalysisE2 Enzyme SpecificitySubstrate SelectionUbiquitin TransferAuto-ubiquitylation AssaySubstrate Ubiquitylation AssayLysine Discharge AssayRecombinant ExpressionEukaryotic ProteinsSDS-PAGEThermal CyclerMaster MixEDTAApyrase

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