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Une méthode de notation microscopique automatisée pour le test de foyers γ-H2AX dans les lymphocytes du sang périphérique humain
JoVE 신문
암 연구학
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JoVE 신문 암 연구학
An Automated Microscopic Scoring Method for the γ-H2AX Foci Assay in Human Peripheral Blood Lymphocytes
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Une méthode de notation microscopique automatisée pour le test de foyers γ-H2AX dans les lymphocytes du sang périphérique humain

DOI:
10.3791/62623-v

•

08:23 min

•

December 25, 2021

•

, , , , , , , , , , ,
1Radiation Biophysics Division, Nuclear Medicine Department,iThemba LABS, 2Department of Biotechnology,University of the Western Cape, 3Department of Medical Biosciences,University of the Western Cape, 4Division of Medical Physiology, Department of Medicine and Health Sciences,Stellenbosch University, 5Biodosimetry Service, Instituto de Investigaciones Biológicas Clemente Estable and Academic Unit on Radiation Protection, Faculty of Medicine,University of the Republic, 6MetaSystems Hard & Software GmbH

Chapters

  • 00:00Introduction
  • 00:44Preparation of Samples
  • 01:26Sample Irradiations
  • 01:35Slide Preparation
  • 02:17Fixation and Immunofluorescence γ-H2AX Staining
  • 03:44Automated Metafer Scanning and Scoring
  • 07:29Results
  • 08:03Conclusion

Summary

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Ce protocole présente la préparation des lames et la notation automatisée du test des foyers γ-H2AX sur les lymphocytes du sang périphérique. Pour illustrer la méthode et la sensibilité du test, des lymphocytes isolés ont été irradiés in vitro. Cette méthode automatisée de détection de l’ADN DSB est utile pour les applications de dosimétrie biologique rapides et à haut débit.

Tags

Keywords: – Automated Microscopic Scoring – γ-H2AX Foci Assay – Human Peripheral Blood Lymphocytes – Ionizing Radiation – DNA Double-strand Breaks – H2AX Phosphorylation – Automated Slide Scanning – Fluorescent Microscopy – Lymphocyte Isolation – Density Gradient Centrifugation – Gamma Irradiation – Cytocentrifugation – Standardized Slide Preparation

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