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Cattura assistita da resina accoppiata con etichettatura isobarica Tandem Mass Tag per la quantificazione multiplexata dell'ossidazione del tiolo proteico
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JoVE 신문 생화학
Resin-Assisted Capture Coupled with Isobaric Tandem Mass Tag Labeling for Multiplexed Quantification of Protein Thiol Oxidation
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Cattura assistita da resina accoppiata con etichettatura isobarica Tandem Mass Tag per la quantificazione multiplexata dell'ossidazione del tiolo proteico

DOI:
10.3791/62671-v

•

07:16 min

•

June 21, 2021

•

, , ,
1Integrative Omics, Biological Sciences Division,Pacific Northwest National Laboratory, 2Bioproducts Sciences and Engineering Laboratory, Department of Biological Systems Engineering,Washington State University

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:31Resin-Assisted Capture
  • 03:52On-Resin Tryptic Digestion and Tandem Mass Tag (TMT) Labeling
  • 04:45Peptide Elution
  • 05:47Results: Analysis of Peptides from Resin-Assisted Capture Enrichment
  • 06:35Conclusion

Summary

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L'ossidazione del tiolo proteico ha implicazioni significative in condizioni fisiologiche e fisiopatologiche normali. Descriviamo i dettagli di un metodo di proteomica redox quantitativa, che utilizza la cattura assistita da resina, la marcatura isobarica e la spettrometria di massa, consentendo l'identificazione sito-specifica e la quantificazione dei residui di cisteina ossidati in modo reversibile delle proteine.

Tags

Keywords: Protein Thiol OxidationResin-assisted CaptureIsobaric Tandem Mass Tag LabelingQuantificationCystine ResiduesSample PreparationAcetone WashProtein SolubilizationBCA AssayCentrifugal FiltrationProtein ReductionDTTBuffer Exchange

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