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Captura asistida por resina junto con etiquetado de etiqueta de masa isobárica en tándem para la cuantificación multiplexada de la oxidación de la proteína tiol
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JoVE 신문 생화학
Resin-Assisted Capture Coupled with Isobaric Tandem Mass Tag Labeling for Multiplexed Quantification of Protein Thiol Oxidation
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Captura asistida por resina junto con etiquetado de etiqueta de masa isobárica en tándem para la cuantificación multiplexada de la oxidación de la proteína tiol

DOI:
10.3791/62671-v

•

07:16 min

•

June 21, 2021

•

, , ,
1Integrative Omics, Biological Sciences Division,Pacific Northwest National Laboratory, 2Bioproducts Sciences and Engineering Laboratory, Department of Biological Systems Engineering,Washington State University

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:31Resin-Assisted Capture
  • 03:52On-Resin Tryptic Digestion and Tandem Mass Tag (TMT) Labeling
  • 04:45Peptide Elution
  • 05:47Results: Analysis of Peptides from Resin-Assisted Capture Enrichment
  • 06:35Conclusion

Summary

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La oxidación de la proteína tiol tiene implicaciones significativas en condiciones fisiológicas y fisiopatológicas normales. Describimos los detalles de un método cuantitativo de proteómica redox, que utiliza captura asistida por resina, etiquetado isobárico y espectrometría de masas, lo que permite la identificación y cuantificación de proteínas de cisteína oxidadas reversibles.

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Keywords: Protein Thiol OxidationResin-assisted CaptureIsobaric Tandem Mass Tag LabelingQuantificationCystine ResiduesSample PreparationAcetone WashProtein SolubilizationBCA AssayCentrifugal FiltrationProtein ReductionDTTBuffer Exchange

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