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면역학 및 감염병학

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在细胞堆中生产腺相关病毒载体，用于大型动物模型的临床前研究

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JoVE 신문 면역학 및 감염병학

Production of Adeno-Associated Virus Vectors in Cell Stacks for Preclinical Studies in Large Animal Models

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在细胞堆中生产腺相关病毒载体，用于大型动物模型的临床前研究

DOI:

10.3791/62727-v

•

07:21 min

•

June 30, 2021

•

Amira D. Rghei, Brenna A. Y. Stevens*¹, Sylvia P. Thomas*¹, Jacob G. E. Yates*¹, Benjamin M. McLeod, Khalil Karimi, Leonardo Susta, Byram W. Bridle, Sarah K. Wootton

¹Department of Pathobiology,University of Guelph

Chapters

00:04Introduction
00:46Double Plasmid Transfection of HEK293 Cells in Cell Stacks
02:30Harvesting Adeno-Associated Virus AAV and Chemical Lysis of The Transfected HEK293 Cells
03:23AAV Vector Purification Using Heparin Affinity Chromatography
05:45Results: Serum Human Monoclonal Antibody (hIgG) Expression in Animals Upon Administration of AAV6.2FF-hIgG
06:41Conclusion

Summary

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在这里，我们提供了使用在细胞堆叠中生长的贴壁HEK 293细胞和亲和色谱纯化大规模生产研究级AAV载体的详细程序。该方案始终如一地产生>1 x 10¹³ 个载体基因组/ mL，提供适合大型动物研究的载体量。

Tags

Keywords: Adeno-associated Virus AAV Viral Vector Production HEK293 Cells Cell Stacks Preclinical Studies Large Animal Models Gene Therapy Heparan Sulfate Cell Culture Polyethyleneimine Centrifugation Clarified Supernatant Cell Pellets

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