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면역학 및 감염병학

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大型動物モデルにおける前臨床試験のための細胞スタックにおけるアデノ関連ウイルスベクターの生成

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면역학 및 감염병학

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JoVE 신문 면역학 및 감염병학

Production of Adeno-Associated Virus Vectors in Cell Stacks for Preclinical Studies in Large Animal Models

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大型動物モデルにおける前臨床試験のための細胞スタックにおけるアデノ関連ウイルスベクターの生成

DOI:

10.3791/62727-v

•

07:21 min

•

June 30, 2021

•

Amira D. Rghei, Brenna A. Y. Stevens*¹, Sylvia P. Thomas*¹, Jacob G. E. Yates*¹, Benjamin M. McLeod, Khalil Karimi, Leonardo Susta, Byram W. Bridle, Sarah K. Wootton

¹Department of Pathobiology,University of Guelph

Chapters

00:04Introduction
00:46Double Plasmid Transfection of HEK293 Cells in Cell Stacks
02:30Harvesting Adeno-Associated Virus AAV and Chemical Lysis of The Transfected HEK293 Cells
03:23AAV Vector Purification Using Heparin Affinity Chromatography
05:45Results: Serum Human Monoclonal Antibody (hIgG) Expression in Animals Upon Administration of AAV6.2FF-hIgG
06:41Conclusion

Summary

자동 번역

ここでは、細胞スタックで増殖した付着HEK 293細胞とアフィニティークロマトグラフィー精製を用いた研究用AAVベクターの大規模生産に関する詳細な手順を提供する。このプロトコルは一貫して>1 x 10¹³ のベクターゲノム/mLを生成し、大規模な動物実験に適したベクター量を提供する。

Tags

Keywords: Adeno-associated Virus AAV Viral Vector Production HEK293 Cells Cell Stacks Preclinical Studies Large Animal Models Gene Therapy Heparan Sulfate Cell Culture Polyethyleneimine Centrifugation Clarified Supernatant Cell Pellets

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