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Produção de vetores de vírus associados a Adeno em pilhas de células para estudos pré-clínicos em grandes modelos animais
JoVE 신문
면역학 및 감염병학
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JoVE 신문 면역학 및 감염병학
Production of Adeno-Associated Virus Vectors in Cell Stacks for Preclinical Studies in Large Animal Models
DOI:

07:21 min

June 30, 2021

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Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:46Double Plasmid Transfection of HEK293 Cells in Cell Stacks
  • 02:30Harvesting Adeno-Associated Virus AAV and Chemical Lysis of The Transfected HEK293 Cells
  • 03:23AAV Vector Purification Using Heparin Affinity Chromatography
  • 05:45Results: Serum Human Monoclonal Antibody (hIgG) Expression in Animals Upon Administration of AAV6.2FF-hIgG
  • 06:41Conclusion

Summary

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Aqui fornecemos um procedimento detalhado para a produção em larga escala de vetores AAV de grau de pesquisa usando células hek 293 aderentes cultivadas em pilhas de células e purificação de cromatografia de afinidade. Este protocolo produz consistentemente >1 x 1013 genomas vetoriais/mL, fornecendo quantidades vetoriais apropriadas para grandes estudos em animais.

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