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Estudos de Interações Acompanhante-Cochaperone usando ensaio homogêneo baseado em contas
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JoVE 신문 생화학
Studies of Chaperone-Cochaperone Interactions using Homogenous Bead-Based Assay

Estudos de Interações Acompanhante-Cochaperone usando ensaio homogêneo baseado em contas

DOI:
10.3791/62762-v

•

06:51 min

•

July 21, 2021

•

, , , ,
1Department of Neuroscience Care and Society, Division of Neurogeriatrics,Karolinska Institutet, 2Department of Pharmaceutical Engineering & Technology,Indian Institute of Technology (BHU), 3Theme Inflammation and Aging,Karolinska University Hospital

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 01:28Coupling of Hsp90 C-Terminal Peptide to the Acceptor Beads
  • 02:49Assay for Interaction Between GST-FKBP51 or GST-FKBP52 and Hsp90 C-Terminal Peptide and Inhibition with Small Molecular Mass Compounds
  • 04:14Dose-Response Curve Generation and IC50 Calculation
  • 04:58Results: Inhibitory Effect of Small Molecular Weight Test Compound D10
  • 05:59Conclusion

Summary

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Este protocolo apresenta uma técnica para sondar interações proteína-proteína usando contas doadoras ligadas à glutationa com co-acompanhantes e contas aceitadoras de TPR fundidas gst-fused e contas aceitadoras juntamente com um peptídeo derivado de Hsp90. Usamos essa técnica para rastrear pequenas moléculas para interromper as interações de interação Hsp90-FKBP51 ou Hsp90-FKBP52 e identificamos inibidores potentes e seletivos de interação Hsp90-FKBP51.

Tags

Keywords: Chaperone-cochaperone InteractionsHsp90FKBP51FKBP52Homogeneous Bead-based AssayHigh-throughput ScreeningInhibitorsAlzheimer’s DiseaseCancerAutoimmune DiseaseTPR DomainDonor And Acceptor BeadsHsp90 PeptideAcceptor Beads ConjugationGlutathione Donor BeadsGSTFKBP51DMSO

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