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Chapters
- 00:05Introduction
- 00:44Generation of Baculovirus-infected TIPS Cells
- 03:05Production of AAV Vector
- 05:08Lysis of Cells and Release of AAV
- 06:07Purification of AAV Vector Using Affinity Column Chromatography System
- 08:03Concentration and Diafiltration of AAV Vector Using Tangential Flow Filtration (TFF)
- 08:54Results: Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector Using Baculovirus-Insect Cell Culture System
- 09:48Conclusion
इस प्रोटोकॉल में, AAV2 वेक्टर को सह-संस्कृति स्पोडोप्टेरा मितव्ययीperda (Sf9) कीट कोशिकाओं द्वारा बाकुलोवायरस (बीवी)-AAV2-ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) या चिकित्सीय जीन और BV-AAV2-rep-टोपी संक्रमित Sf9 कोशिकाओं के साथ निलंबन संस्कृति में उत्पादित Sf9 कोशिकाओं द्वारा उत्पादित किया जाता है । एएवी कणों को डिटर्जेंट का उपयोग करके कोशिकाओं से छोड़ा जाता है, स्पष्ट किया जाता है, आत्मीयता कॉलम क्रोमेटोग्राफी द्वारा शुद्ध किया जाता है, और स्पर्शरेखा प्रवाह निस्पंदन द्वारा केंद्रित किया जाता है।
