Name: Het meten van fotofysiologie van attached stage van Colacium sp. door een Cuvette-Type Fast Repetition Rate Fluorometer (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Leer fotofysiologie meten van gehechte Colacium sp. met een cuvette-type fast repetition rate fluorometer. Deze methode onderzoekt fotosynthese in real-time bij algen op zooplankton.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Het werk werd ondersteund door het Collaborative Research Fund van de prefectuur Shiga getiteld "Study on water quality and lake-bottom environment for the protection of the soundness of water environment" onder de Japanse grant for regional revitalization and the Environment Research and Technology Development Fund (No. 5-1607) van het ministerie van Milieu, Japan. https://www.kantei.go.jp/jp/singi/tiiki/tiikisaisei/souseikoufukin.html. De auteurs willen Enago (www.enago.jp) bedanken voor de Engelstalige review.

1. Steekproeven
<ol><li>Verzamel meerwater van het oppervlak door een emmer. Om Colacium sp. bevestigd aan S. mucronata (figuur 1A-C) te richten, filter 0,5-10 L meerwater met behulp van een nylon gaasnet van 100 μm52. OPMERKING: S. mucronata vaak dicht aggregeren in ondiep, eutroof, modderig water, zoals tussen riet (phragmites) gebieden.</li>
	<li>Bewaar de geconcentreerde monsters in plastic flessen van 500 ml met 350 ml meerwater. Bewaren in donkere omstandigheden.</li>
	<li>Giet in het laboratorium het monsterwater in een bekerglas van 500 ml en laat het een paar minuten bezinken.</li>
	<li>Filter het water van het meer door een poriegroot filter van 0,2 μm.</li>
	<li>Haal S. op. mucronata individuen met behulp van een pipet onder een optische microscoop bij 100x vergroting. Voer soortidentificatie uit volgens Błędzki en Rybak53.</li>
	<li>Breng ze over in een druppel van 0,2 μm gefilterd meerwater (FLW) geplaatst op een glazen glijbaan. OPMERKING: S. mucronata kan naar de oppervlakte zwemmen of zich hechten aan de bekerwand.</li>
	<li>Controleer S. mucronata onder lichtmicroscopie.</li>
	<li>Wassen S. mucronata-individuen die FLW (3 druppels of meer) gebruiken om besmetting door andere organismen te voorkomen (figuur 2).</li>
	<li>Houd S. mucronata bij een in situ temperatuur in een groeikamer onder 40 μmol foton·m−2·s−1.</li>
</ol>2. Effecten van S . mucronata op baseline fluorescentie
<ol><li>
S. mucronata teelt<ol>
<li>Pak S. mucronata-personen op met een pipet onder een optische microscoop met een vergroting van 100x en was met FLW, zoals in stap 1.8.</li>
		<li>Belucht kraanwater met behulp van een elektrische luchtpomp via een luchtsteen gedurende ten minste 1 week. Giet 300 ml belucht leidingwater in een glazen pot van 350 ml.</li>
		<li>Voer Chlorella (1 mg C·L−1) en houd op 20 °C onder 40 μmol foton·m−2·s−1 in een groeikamer.</li>
		<li>Na ongeveer 14 dagen, pak 5-30 personen op met behulp van een pipet onder een optische microscoop bij 100x vergroting en ent ze in 300 ml schoon, belucht kraanwater om het medium vers te houden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>FRRf instellen<ol>
<li>Start de Act2Run software.</li>
		<li>Klik op het tabblad Opties en selecteer Act2 FLC (witte LED's) in Werkingsmodus om de kleur van de actinische LED's in te stellen.</li>
		<li>Klik op de waarde van Donker bij stap 1 van de instellingen van de fluorescerende lichtcurve in het hoofdvenster en typ 30 om de duur van de donkere periode in te stellen (figuur 3A).</li>
		<li>Klik op de LED-combinatie B, C en D om de groene en oranje LED's uit te schakelen (figuur 3C).</li>
		<li>Klik op de waarde van Fets en Pitch onder Sat en typ respectievelijk 100 en 2 om het aantal en de toonhoogte van de flashlet in de verzadigingsfase in te stellen (Figuur 3D).</li>
		<li>Klik op de waarde van Fets en Pitch onder Rel en typ respectievelijk 40 en 60 om het aantal en de toonhoogte van de flashlet in de ontspanningsfase in te stellen (figuur 3E).</li>
		<li>Activeer de watermantelpomp door op Tijdens FLC (figuur 3F) te klikken om de monstertemperatuur tijdens de meting te regelen.</li>
		<li>Activeer door op Auto-LED en Auto-PMT (Figuur 3F) te klikken.</li>
		<li>Klik op Synchroniseren om FRRf-Act2 te verbinden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>FRRf metingen<ol>
<li>Om de effecten van zoöplankton individuen op baseline fluorescentie te onderzoeken, bereid volwassen S. voor. mucronata (lichaamsgrootte 400-650 μm) uit de kweek in stappen 2.1.1-2.1.4 zonder aangehechte organismen.</li>
		<li>Om fluorescentie van de darminhoud te voorkomen, verhongert u de personen in FLW bij 20 °C gedurende ten minste 90 minuten.</li>
		<li>Giet 1,5 ml FLW in een cuvette. Pak 0, 1, 5 en 10 S. mucronata individuen op met behulp van een pipet onder een optische microscoop bij 100x vergroting.</li>
		<li>Overdracht S. mucronata individuen in de cuvette en voeg FLW toe om het monster tot 2 ml te brengen.</li>
		<li>Acclimatiseren bij weinig licht (1-10 μmol foton·m−2·s−1) bij 20 °C gedurende 15 minuten vóór frRf-meting.</li>
		<li>Klik op Act2 Run om de meting te starten. Herhaal de metingen >3 keer per monster.</li>
		<li>Lees de Fo-waarde af van de resultatenplot (figuur 4).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Effecten van substraatorganisme op Chl-a fluorescentie
<ol><li>
Colacium sp. teelt<ol>
<li>Bereid de FLW en AF-6 medium54 voor op de teelt (tabel 2).</li>
		<li>Verzamel Colacium sp. bevestigd aan S. mucronata zoals in stap 1.1 en 1.2 en houd op in situ temperatuur in een groeikamer.</li>
		<li>Pak Colacium sp. op met een verveld carapax (figuur 1D) met behulp van een pipet onder een optische microscoop bij een vergroting van 100x. Was ze met FLW, zoals in stap 1.8.</li>
		<li>Aseptisch ent Colacium sp. en AF-6 medium in een glazen buis van 10 ml op een schone bank.</li>
		<li>Houd de cultuur op in situ temperatuur onder 200 μmol foton·m−2·s−1 in een groeikamer. Schud de glazen buis minstens één keer per dag voorzichtig met de hand om celafzetting te voorkomen. OPMERKING: Om het dempende effect van geaggregeerde kolonies zo laag mogelijk te houden, controleert u de kolonies onder een microscoop voorafgaand aan de FRRf-meting. Celaggregatie kan dichte kolonies veroorzaken en de fotofysiologie van algen beïnvloeden55.</li>
	</ol>
</li>
	<li>FRRf metingen<ol>
<li>Om de effecten van zoöplankton individuen op Chl-a fluorescentie van Colacium sp. te onderzoeken, bereid volwassen S. voor. mucronata (lichaamsgrootte 400-650 μm) zonder aangehechte organismen.</li>
		<li>Om fluorescentie van de darminhoud te voorkomen, verhongert u de personen in FLW gedurende ten minste 90 minuten.</li>
		<li>Stel een cuvette-type snelle herhalingssnelheid fluorometer (FRRf) in.</li>
		<li>Giet een substeekproef van 1,5 ml voorgekweekt Colacium sp. in een cuvette. 0, 5, 10 en 15 S overbrengen. mucronata individuen in deze cuvetten en voeg 2 μm gefilterd medium toe om het monster tot 2 ml te brengen.</li>
		<li>Acclimatiseer bij weinig licht (1-10 μmol foton·m−2·s−1) bij 20 °C gedurende 15 minuten voordat de FRRf-meting wordt uitgevoerd. OPMERKING: Houd de monsters op incubatietemperatuur tijdens metingen</li>
		<li>Klik op Act2 Run om de meting te starten. Herhaal de metingen >3 keer per monster.</li>
		<li>Lees de FO- en Fm-waarden uit de resultatenplot (figuur 4). OPMERKING: Controleer de RσPSII-waarde (tabel 1), die laat zien of het LED-vermogen binnen het optimale bereik ligt om de PSII-parameters correct te schatten. Wanneer de Auto-LED wordt geactiveerd, regelt het Act2run-systeem het LED-vermogen om een optimaal RσPSII-bereik (0.042-0.064) te bereiken. De experimentele RσPSII-afkapwaarde werd in een eerdere studie gedefinieerd op 0,03 en 0,0848.</li>
		<li>Om de basisfluorescentie22 te corrigeren, filtert u het kweekmedium met behulp van een poriegroot filter van 0,2 μm en meet u de fluorescentie. Trek FO van het basislijnvoorbeeld af van FO en Fm van Colacium sp., of wijzig de waarde voor blancocorrectie in de instellingen op het tabblad Opties.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Fotofysiologie van Colacium sp. (bijgevoegd stadium)
<ol><li>Isoleer S. mucronata-individuen met Colacium sp. met behulp van een pipet onder een optische microscoop.</li>
	<li>Wassen S. mucronata met FLW, zoals in stap 1.8.</li>
	<li>Overdracht S. mucronata in een 100 ml FLW. Voor uithongering, onder donkere omstandigheden op in situ temperatuur gedurende 90 minuten bewaren.</li>
	<li>Giet 1,5 ml FLW in een cuvette.</li>
	<li>Overdracht ~10 S. mucronata individuen met Colacium sp. in een cuvette. Voor metingen zijn meer dan 100 Colaciumcellen per 2 ml nodig. Voeg FLW toe om het monster tot 2 ml te brengen.</li>
	<li>Acclimatiseren bij weinig licht (1-10 μmol foton·m−2·s−1) bij in situ temperatuur gedurende 15 min. Meet Chl-a fluorescentie zoals in stap 3.2.6-3.2.8.</li>
	<li>Om het aantal aangehechte cellen te inventariseren, fixeert u het monster met glutaaraldehyde (2% eindvolume) na het nemen van de FRRf-meting. Maak foto's op verschillende scherptedieptes en posities van S. mucronata onder een lichtmicroscoop.</li>
</ol>5. Fotofysiologie van Colacium sp. (planktonische fase)
<ol><li>Kweek bemonsterd Colacium sp. in AF-6 medium bij in situ temperatuur zoals in stap 3.1.1-3.1.5.</li>
	<li>Neem voor de stationaire fase 2 ml gekweekt Colacium sp. en giet in een cuvette.</li>
	<li>Acclimatiseren bij weinig licht (1-10 μmol foton·m−2·s−1) bij in situ temperatuur gedurende 15 min. Meet Chl-a fluorescentie zoals in stap 3.2.6-3.2.8.</li>
</ol>6. Effecten van Ca en Mn toevoeging op de fotofysiologie van Colacium sp.
<ol><li>Effecten op het bijgevoegde podium<ol>
<li>Isoleer S. mucronata-individuen met Colacium sp. met behulp van een pipet onder een optische microscoop. Wassen met FLW, zoals in stap 1.8.</li>
		<li>Breng elk zes personen over in 12 glazen bekers met 30 ml FLW. Zorg ervoor dat elk bekerglas >100 Colacium sp. cellen bevat.</li>
		<li>200 μmol bijtellen· L−1 CaCl2· H2O (Ca behandeling), 40 μmol· L−1 MnCl4 (Mn-behandeling) of ultrapuur water (controle) voor elk bekerglas. Incubeer de monsters onder 200 μmol foton·m−2 ·s−1 bij in situ temperatuur in een groeikamer.</li>
		<li>Breng na 3 uur en 21 uur alle individuen en vervelde huiden over in een cuvette met 2 ml van het medium.</li>
		<li>Om de snelle reactie op toenemend licht te onderzoeken, klikt u op Omhoog van de perioden van 8 actinische lichtstappen en typt u 20 (figuur 3A) om de duur van elke stap in 20 s in te stellen. Om het stapsgewijze actinische licht in te stellen als 0, 11, 25, 44, 68, 101, 144 en 200 μmol foton·m−2·s−1, klikt u op Hoge E en Stap omhoog en wijzigt u de waarden in respectievelijk 200 en 34 (figuur 3B).</li>
		<li>Meet na 15 minuten donkere acclimatisatie de Chl-a-fluorescentie van elk monster vergelijkbaar met stap 3.2.6-3.2.8. OPMERKING: Controleer of de waarden van RσPSII en RσPSII zich binnen het optimale bereik (0,03-0,08)48 bevinden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Effecten op het planktonstadium<ol>
<li>Kweek bemonsterd Colacium sp. in AF-6 medium bij in situ temperatuur zoals in stap 3.1.1-3.1.5.</li>
		<li>Breng het gekweekte Colacium sp. over in FLW en acclimatiseer bij een in situ temperatuur van minder dan 200 μmol foton·m−2·s−1 gedurende 3 dagen.</li>
		<li>Breng 1 ml van de geacclimatiseerde monsters over in drie glazen injectieflacons met 10 ml FLW.</li>
		<li>200 μmol bijtellen· L−1 CaCl2· H2O (Ca behandeling), 40 μmol· L−1 MnCl3 (Mn-behandeling), of ultrapuur water (controle) naar injectieflacons. Incubeer de monsters onder 200 μmol foton·m−2·s−1 bij in situ temperatuur in een groeikamer.</li>
		<li>Meet na 3 uur en 21 uur de Chl-a-fluorescentie van elk monster zoals in de stappen 3.2.6-3.2.8.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

De auteurs hebben geen onthullingen te verklaren.

Dit protocol toonde voor het eerst aan dat de fotofysiologie van Colacium sp. tijdens de bijgevoegde fase in een natuurlijke omgeving vergelijkbaar is met de planktonische fase in AF-6 medium. Bovendien had de darminhoud van uitgehongerde S. mucronata geen invloed op baseline en Chl-a fluorescentie wanneer de dichtheid ≤5 inds·mL−1 was (figuur 5 en figuur 6). Deze resultaten suggereren dat dit protocol de fotofysiologie van ...

Chlorofyl variabele fluorescentie is een nuttig hulpmiddel voor het meten van algen fotosysteem II (PSII) fotofysiologie. Algen reageren op verschillende omgevingsstressen, zoals overtollig licht en tekort aan voedingsstoffen, door hun PSII-fotofysiologie te veranderen. Snelle herhalingssnelheid fluorometer (FRRf) is een veelgebruikte methode voor het meten van PSII-fotofysiologie1,2 en het schatten van de primaire productiviteit1,3,4, waarmee fytoplankton PSII-fotofysiologie kan worden gemonitord, evenals de primaire productiviteit op brede ruimtelijke en temporele schalen5,6,7. FRRf kan tegelijkertijd psii (σ PSII) absorptiedoorsnede, reactiecentrum ([RCII]) concentratie, maximale fotochemische efficiëntie (Fv /Fm), effectieve fotochemische efficiëntie (Fq ′ / Fm ′) en niet-fotochemische blussen (NPQNSV) meten (tabel 1). Over het algemeen worden Fv/Fm en Fq′/Fm′ gedefinieerd als PSII-activiteit8, terwijl NPQNSV wordt gedefinieerd als relatieve warmte-afgevoerde energie9.
Belangrijk is dat single turnover (ST) flitsen van FRRf de primaire chinonelektronacceptor, QA, volledig verminderen, maar niet de plastochinonpool. Omgekeerd kunnen meervoudige omzet (MT) flitsen van een pulsamplitudemodulatie (PAM) fluorometer beide verminderen. De ST-methode heeft een duidelijk voordeel ten opzichte van de MT-methode bij het identificeren van de mogelijke oorsprong van NPQNSV door gelijktijdig de herstelkinetiek van Fv/Fm, Fq′/Fm′, NPQNSV en σ PSII10 te meten. Tot op heden zijn verschillende soorten FRRf-instrumenten, zoals submersible-type, cuvette-type en flow-through-type, commercieel verkrijgbaar. Het submersible-type FRRf maakt in situ metingen in oceanen en meren mogelijk, terwijl de cuvette-type FRRf geschikt is voor het meten van kleine monstervolumes. Het doorstroomtype wordt vaak gebruikt om continu de fotofysiologie van fytoplankton in oppervlaktewateren te meten.
Gezien de ontwikkeling van PAM-fluorometers, inclusief het cuvette-type, voor een breed scala aan onderwerpen11, komen PAM-fluormeters nog steeds vaker voor dan FRRfs in algenfotofysiologisch onderzoek12. Hoewel de structuur van de monsterkamer en de cuvettecapaciteit tussen deze gereedschappen slechts enigszins verschillen, is het cuvette-type PAM bijvoorbeeld toegepast op fytoplankton13,14,15, benthische microalgen16,17,18, ijsalgen19 en epizoïsche algen20, terwijl de cuvette-type FRRf voornamelijk is toegepast op fytoplankton21,22,23 en een beperkt aantal ijsalgengemeenschappen24,25. Gezien de effectiviteit is cuvette-type FRRf evenzeer van toepassing op benthische als epizoïsche algen. Daarom zal het uitbreiden van de toepassing ervan veel inzicht geven in psii-fotofysiologie, met name voor minder bekende epizoïsche algenfotofysiologie.
Epizoïsche algen hebben weinig aandacht gekregen, met weinig studies die hun PSII-fotofysiologie onderzoeken20,26, hoogstwaarschijnlijk vanwege hun kleine rol in aquatische voedselwebben27,28. Epibionten, waaronder epizoïsche algen, kunnen echter een positieve invloed hebben op de dynamiek van de zoöplanktongemeenschap, zoals toenemende reproductie- en overlevingskansen29,30, evenals een negatieve invloed op processen, zoals een toenemende zinksnelheid29,31 en kwetsbaarheid voor visuele roofdieren32,33,34,35,36 . Daarom is het onderzoeken van de omgevings- en biologische factoren die de epibiontdynamiek in zoöplanktongemeenschappen beheersen, cruciaal.
Onder epizoïsche algen is Colacium Ehrenberg 1834 (Euglenophyta) een veel voorkomende zoetwater-, algengroep32,37,38,39 met verschillende levensfasen, waaronder gehecht (figuur 1A-D), niet-beweeglijke planktonische (figuur 1E, F) en beweeglijke planktonstadia40,41 . Tijdens het niet-beweeglijke planktonische stadium leven cellen als eencellig plankton, geaggregeerde kolonies of eenlaagse plaatkolonies, bedekt met slijm42. In het aangehechte stadium gebruikt Colacium sp. slijm dat wordt uitgescheiden uit het voorste uiteinde van de cel37,39,41 om zich te hechten aan substraatorganismen (basibionten), met name microschaaldieren41,43. Hun levenscyclus omvat ook het losmaken van het vermolmde exoskelet of dode basibiont en zwemmen met hun flagella om een ander substraatorganisme te vinden39. Zowel planktonische als aangehechte stadia kunnen hun populatiegrootte vergroten door mitose40. Hoewel hun bijgevoegde stadium wordt verondersteld een evolutionaire eigenschap te zijn voor het verzamelen van bronnen, zoals licht44 en sporenelementen41,45,46, of als een dispersiestrategie27, is er weinig experimenteel bewijs beschikbaar over deze aspecten37,41,44 en de belangrijkste hechtingsmechanismen zijn grotendeels onbekend. Rosowski en Kugrens verwachtten bijvoorbeeld dat Colacium mangaan (Mn) verkrijgt uit substraat roeipootkreeftjes41, geconcentreerd in het exoskelet47.
Hier beschrijven we hoe psii-fotofysiologie van planktonalgen en de bijbehorende toepassingsmethode voor het richten op aangehechte algen (hechting aan zoöplankton) met Colacium sp. cellen met behulp van de cuvette-type FRRf. We gebruiken het Act2-systeem uitgerust met drie light-emitting diodes (LED's) die zorgen voor flitsexcitatie-energie gecentreerd op 444 nm, 512 nm en 633 nm48. Hier komt 444 nm (blauw) overeen met de absorptiepiek van chrophyll a (Chl-a), terwijl 512 nm (groen) en 633 nm (oranje) overeenkomen met de absorptiepieken van respectievelijk fycoerythrin en phycocyanine. De fluorescentiesignaaldetectiepiek is 682 nm met 30 nm halve bandbreedte. Omdat het moeilijk is om het planktonische stadium van Colacium sp. in natuurlijke omgevingen te vinden, werd hun bijgevoegde stadium verzameld voor de experimenten. Onder de talrijke substraatorganismen,Scapholeberis mucronata O.F. Müller 1776 (Branchiopoda, Daphniidae; Figuur 1A, B, G) is een van de eenvoudigste om te hanteren vanwege hun langzame zwemsnelheid, grote lichaamsgrootte (400-650 μm) en uniek gedrag (ondersteboven hangen aan het wateroppervlak). Daarom gebruikt dit protocol Colacium sp. bevestigd op S. mucronata als een casestudy van het Colacium-basibiont-systeem. Om fluorescentie afgeleid van de darminhoud te voorkomen, werd S. mucronata uitgehongerd. Aangezien een eerdere studie meldde dat het fluorescentiesignaal van darminhoud (ingenomen algen) een vijfvoudige afname vertoont na 40 min49, verwachtten we dat 90 minuten uithongering voldoende zou zijn om de mogelijkheid van darminhoudfluorescentie die de FRRf-meting beïnvloedt te minimaliseren met minimale effecten van experimentele stress op Colacium sp., zoals tekort aan voedingsstoffen. Bovendien werd dit protocol toegepast om het hechtingsmechanisme van Colacium sp. te verduidelijken en te bepalen hoe twee metalen, calcium (Ca) en mangaan (Mn) de fotofysiologie van zowel planktonische als gehechte stadia beïnvloeden. Calcium speelt op meerdere manieren een sleutelrol in de fotosynthetische routes50, en beide metalen zijn nodig om de zuurstof-evoluerende complexen van de PSII51 te construeren. Aangezien calcium en mangaan sterk geconcentreerd zijn in het schild van schaaldier zoöplankton47, veronderstellen we dat Colacium sp. fotofysiologie prominenter zou kunnen reageren op Ca- en Mn-verrijking tijdens de planktonische fase als deze levensfase deze elementen van S. mucronata verkrijgt tijdens de bijgevoegde fase.

<table><tbody><tr><td>Acrodisc-spuitfilter</td><td>Pall Corporation, Ann Arbor, MI, USA</td><td></td><td>0,2 &mu;m poriegrootte</td></tr><tr><td>Act2Run</td><td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biotine</td><td>Wako</td><td>023-08711</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>CaCl2&middot;2H2O</td><td>Wako</td><td>031-25031</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>CaCO3</td><td>Wako</td><td>036-00382</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>Citroenzuur</td><td>Wako</td><td>036-05522</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>CoCl2&middot;6H2O</td><td>Wako</td><td>036-03682</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>Geconcentreerde Chlorella</td><td>Recenttec, Tokyo, Japan</td><td></td><td>20 mg C&middot;mL&minus;1 ; bewaar bij 4 &deg;C</td></tr><tr><td>FastOcean Act2</td><td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fe-citraat</td><td>Wako</td><td>093-00952</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>FeCl3&middot;6H2O</td><td>Wako</td><td>091-00872</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>HCLP-880PF</td><td>Nippon Medical and Chemical Instruments &nbsp;Co., Ltd., Osaka, Japan</td><td></td><td>Met LED-lichtbronnen</td></tr><tr><td>K2HPO4</td><td>Wako</td><td>160-04292</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Wako</td><td>167-04241</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>MgSO4&middot;7H2O</td><td>Wako</td><td>137-00402</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>MnCl3&middot;4H2O</td><td>Wako</td><td>139-00722</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>Na2EDTA</td><td>Wako</td><td>343-01861</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>Na2MoO4</td><td>Wako</td><td>196-02472</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>NaNO3</td><td>Wako</td><td>191-02542</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>NH4NO3</td><td>Wako</td><td>015-03231</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>Planktonteller</td><td>Matsunami Glass, Osaka, Japan</td><td>S6300</td><td></td></tr><tr><td>Pylex-reageerbuisje</td><td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td><td></td><td>Met rand, 16 x 100 mm</td></tr><tr><td>Vit. B1</td><td>Wako</td><td>203-00851</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>Vit. B12</td><td>Wako</td><td>226-00343</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>Vit. B6</td><td>Wako</td><td>165-05401</td><td>AF-6 medium</td></tr><tr><td>ZnSO4&middot;7H2O</td><td>Wako</td><td>264-00402</td><td>AF-6 medium</td></tr></tbody></table>

het meten van fotofysiologie van attached stage van colacium sp. door een cuvette-type fast repetition rate fluorometer

Measuring Photophysiology of Attached Stage of Colacium sp. by a Cuvette-Type Fast Repetition Rate Fluorometer

Snelle herhalingssnelheid fluorometer (FRRf) is een nuttige methode voor het meten van fotosysteem II (PSII) fotofysiologie en primaire productiviteit. Hoewel FRRf psii-absorptiedoorsnede (σ PSII), maximale fotochemische efficiëntie (Fv / Fm), effectieve fotochemische efficiëntie (Fq ′ / Fm ′) en niet-fotochemische blussen (NPQNSV) voor verschillende eukaryote algen en cyanobacteriën kan meten, hebben bijna alle FRRf-studies tot nu toe zich gericht op fytoplankton. Hier beschrijft het protocol hoe psii-fotofysiologie van een epizoïsche alg Colacium sp. Ehrenberg 1834 (Euglenophyta), in zijn bijgevoegde fase (bevestigd aan zoöplankton), met behulp van cuvette-type FRRf. Eerst schatten we de effecten van substraat zoöplankton (Scapholeberis mucronata O.F. Müller 1776, Cladocera, Daphniidae) op baseline fluorescentie en σ PSII, Fv/Fm, Fq′/Fm′en NPQNSV van planktonic Colacium sp. Om deze methodologie te valideren, registreerden we fotofysiologische metingen van attached Colacium sp. op S. mucronata en vergeleken deze resultaten met het planktonstadium. Representatieve resultaten toonden aan hoe het protocol de effecten van calcium (Ca) en mangaan (Mn) op colacium sp. fotofysiologie kon bepalen en de verschillende effecten van Mn-verrijking tussen gehechte en planktonstadia kon identificeren. Tot slot bespreken we het aanpassingsvermogen van dit protocol aan andere perifytische algen.

Er was geen significant effect van baseline fluorescentie (figuur 5) of Chl-a fluorescentie (figuur 6) door S. mucronata tot 5 individuen (inds.) ml−1. Fv/Fm en NPQNSV werden echter significant beïnvloed wanneer S. mucronata 7,5 inds·mL−1 was. Daarom hebben we voor het meten van de fotofysiologie van Colacium sp. tijdens de bijgevoegde fase geko...

Snelle herhalingssnelheid fluorometer (FRRf) is een nuttige methode voor het meten van fotosysteem II fotofysiologie en primaire productiviteit. Hier beschrijven we een protocol om PSII-fotofysiologie van epizoïsche alg, Colacium sp. op substraat zoöplankton te meten met behulp van cuvette-type FRRf.

Het meten van fotofysiologie van attached stage van Colacium sp. door een Cuvette-Type Fast Repetition Rate Fluorometer

Fast repetition rate fluorometer (FRRf) is a beneficial method for measuring photosystem II (PSII) photophysiology and primary productivity. Although FRRf ...

Dit protocol meet de fotosynthetische activiteit van aangehechte algen, terwijl ze zich nog hechten aan het plankton, net als in de natuur. Het grote voordeel van deze techniek is dat de meting van fotofysiologie in real-time kan worden gedaan zonder afleiding van het monster. Om de effecten van zoöplankton individuen op baseline fluorescentie te onderzoeken, bereid volwassen scapholeberis mucronata uit de cultuur zonder enige aangehechte organismen.Honger nu de individuen in FLW uit bij 20 graden Celsius gedurende ten minste 90 minuten om fluorescentie van het darmgehalte te voorkomen. Giet 1,5 milliliter FWL in een cuvette. Pak het gewenste aantal s op.mucronata-individuen met behulp van een pipet onder een optische microscoop bij 100-voudige vergroting en breng ze over in het cuvet. Voeg FLW toe om het monstervolume tot 2 milliliter te brengen en laat het acclimatiseren bij weinig licht bij 20 graden Celsius gedurende 15 minuten vóór de snelle herhalingssnelheid fluorometermeting. Klik vervolgens op act to run om de meting te starten en herhaal de metingen meer dan drie keer per monster.Lees de F0-waarde van de resulterende plot. Pak colaciumsoorten op met een vermolten carapax

measuring-photophysiology-attached-stage-colacium-sp-cuvette-type

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Druppel op basis van microfluïdische platforms zijn veelbelovende kandidaten voor high throughput experimenten, omdat zij in staat zijn om goedkoop te genereren picoliter, self-gecompartimenteerde schepen op kHz tarieven. Door integratie met snelle, gevoelige en een hoge resolutie fluorescentie spectroscopische methoden, kunnen de grote hoeveelheden informatie uit die in deze systemen efficiënt kunnen worden geëxtraheerd, aangewend en gebruikt.

Fluorescentie detectiemethoden voor microfluïdische druppel platforms

Förster resonance energy transfer (FRET) microscopie is een krachtige techniek voor real-time monitoring van signalering gebeurtenissen in levende cellen met behulp van verschillende biosensoren als verslaggevers. Hier beschrijven we hoe u een aangepaste epifluorescentie bouwen FRET beeldverwerkingssysteem van in de handel verkrijgbare componenten en hoe deze te gebruiken voor FRET experimenten.

FRET microscopie voor Real-time monitoring van Signalering Evenementen in levende cellen met behulp Unimoleculaire Biosensoren

This video demonstrates the technique of fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) to study protein homo-oligomerization. Fluorescently-labeled proteins in a sample are dimerized using an agent when studying protein oligomerization using FFS. Using a confocal microscope, as the proteins move in and out of the small observation volume, the analysis of the fluctuations in the brightness of the fluorescent molecules is performed to determine the oligomeric state of the proteins.

Fluorescence Fluctuation Spectroscopy to Study Protein Homo-Oligomerization

Source: Kulkarni, M. et al. Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the use of two-photon microscopy to monitor calcium dynamics in cone photoreceptors of a transgenic mouse retina. It outlines the steps for preparing retinal slices, imaging FRET-based calcium biosensors, and analyzing fluorescence changes to quantify calcium levels under background illumination and light stimulation.

Two-Photon Microscopy for Monitoring Calcium Dynamics in Mouse Retinal Cone Photoreceptors

Meten Intracellulaire Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Veranderingen in Human Sperm behulp Vier Technieken: Conventionele fluorometrie, Gestopt Flow fluorometrie, flowcytometrie en Single cell imaging

Momenteel worden de meeste beschikbare calciumindicatoren gebruikt om cytoplasmatische calciumtransienten te kwantificeren als indirecte maatstaven voor calcium dat vrijkomt uit het sarcoplasmatisch reticulum in gekweekte gladde spiercellen. Dit protocol beschrijft het gebruik van een specifieke FRET-gebaseerde indicator die directe meting van calciumsignalen binnen het sarcoplasmatisch reticulum lumen mogelijk maakt.

Meting van Calcium Schommelingen Binnen het sarcoplasmareticulum van gekweekte gladde spiercellen Met behulp van FRET-gebaseerde confocale Imaging

In het hart, moleculaire gebeurtenissen coördineren van de elektrische en contractiele functie van het orgel. Een set van de lokale veld fluorescentiemicroscopie technieken hier gepresenteerde maakt de registratie van cellulaire variabelen in intacte harten. Het identificeren van mechanismen voor het definiëren van de hartfunctie is van cruciaal belang in het begrijpen hoe het hart werkt onder pathologische situaties.

Lokale Field fluorescentiemicroscopie: Beeldvorming van cellulaire signalen in Intact Hearts

Hier beschrijven we optische acquisitie en karakterisering van actiepotentiaalen van geïnduceerde pluripotente stamcel afgeleide cardiomyocyten met behulp van een snel modulair fotometriesysteem.

Eencellige optische actiepotentiaalmeting in door de mens geïnduceerde pluripotente van stamcellen afgeleide cardiomyocyten

Dit artikel presenteert een methode voor spatiotemporale analyse van mobiele, single-molecule Förster resonantie energieoverdracht (smFRET)-gebaseerde probes met behulp van widefield fluorescentiemicroscopie. De nieuw ontwikkelde softwaretoolkit maakt het mogelijk om smFRET-tijdsporen van bewegende sondes te bepalen, inclusief de juiste FRET-efficiëntie en de moleculaire posities, als functies van de tijd.

Geautomatiseerde tweedimensionale spatiotemporale analyse van mobiele fret-sondes met één molecuul

Het huidige protocol beschrijft stapsgewijze autofluorescentiebeeldvorming en evaluatie van fycobiliproteïneveranderingen in rode algen op basis van spectrale analyse. Dit is een labelvrije en niet-destructieve methode om cellulaire aanpassing aan extreme habitats te evalueren, wanneer alleen schaars materiaal beschikbaar is en cellen langzaam of helemaal niet groeien onder laboratoriumomstandigheden.

Autofluorescentie beeldvorming om de fysiologie van rode algen te evalueren

Leer fotofysiologie meten van gehechte Colacium sp. met een cuvette-type fast repetition rate fluorometer. Deze methode onderzoekt fotosynthese in real-time bij algen op zooplankton.

Het meten van fotofysiologie van attached stage van Colacium sp. door een Cuvette-Type Fast Repetition Rate Fluorometer

Meer video's verkennen