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Troca específica de resíduo de Proline por Análogos Proline em Proteínas Fluorescentes: Como a "Cirurgia Molecular" da espinha dorsal afeta o dobrável e a estabilidade
JoVE 신문
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JoVE 신문 생체공학
Residue-Specific Exchange of Proline by Proline Analogs in Fluorescent Proteins: How “Molecular Surgery” of the Backbone Affects Folding and Stability

Troca específica de resíduo de Proline por Análogos Proline em Proteínas Fluorescentes: Como a "Cirurgia Molecular" da espinha dorsal afeta o dobrável e a estabilidade

DOI:
10.3791/63320-v

•

10:31 min

•

February 03, 2022

•

, , , ,
1Institute of Chemistry,Technische Universität Berlin, 2Department of Chemistry,University of Manitoba, 3Institute of Physics,Martin-Luther-Universität Halle-Wittenberg

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 01:39Production of Recombinant Wild-Type Fluorescent Proteins and Selective Pressure Incorporation to Produce Fluorescent Proteins with Proline Analogs
  • 04:08Fluorescence Emission of Protein Variants
  • 05:00Denaturation and Refolding of EGFP Variants
  • 06:38Results: Effect of Atomic Substitutions in Variants of GFP
  • 09:17Conclusion

Summary

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Para superar as limitações da mutagênese clássica dirigida ao local, os análogos proline com modificações específicas foram incorporados em várias proteínas fluorescentes. Mostramos como a substituição do hidrogênio por flúor ou do single por dupla ligação em resíduos de prolina ("cirurgia molecular") afeta propriedades proteicas fundamentais, incluindo sua dobra e interação com a luz.

Tags

Keywords: Proline AnalogNon-canonical Amino AcidProtein FoldingProtein StabilityMolecular SurgeryFluorescent ProteinSite-directed MutagenesisRibosomal Protein TranslationProtein EngineeringE. Coli CultureNMM MediumOptical DensityCell SuspensionCentrifugationAmino Acid DepletionAmpicillin

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