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Ablación mediada por nitrorreductasa/metronidazol y una plataforma MATLAB (RpEGEN) para estudiar la regeneración del epitelio pigmentario de la retina del pez cebra
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JoVE 신문 생물학
Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform (RpEGEN) for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium
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Ablación mediada por nitrorreductasa/metronidazol y una plataforma MATLAB (RpEGEN) para estudiar la regeneración del epitelio pigmentario de la retina del pez cebra

DOI:
10.3791/63658-v

•

13:12 min

•

March 02, 2022

•

, ,
1Department of Ophthalmology, Louis J. Fox Center for Vision Restoration,University of Pittsburgh School of Medicine, 2Earth Research Institute,University of California, Santa Barbara, 3Department of Developmental Biology,University of Pittsburgh School of Medicine

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 01:00Screening Zebrafish Larvae for rpe65a:nfsB-eGFP and Genetic Ablation of the Retinal Pigment Epithelium
  • 03:02Incorporating Pharmacological Treatment into Zebrafish Retinal Pigment Epithelium Ablation Protocol
  • 06:35Confocal Microscope Z-stack Image Preprocessing in FIJI (ImageJ)
  • 08:19Quantification and Visualization of RPE Regeneration Using RpEGEN Scripts
  • 10:42Results: RPE Expression, Ablation, Regeneration Quantification
  • 12:39Conclusion

Summary

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Este protocolo describe la metodología para extirpar genéticamente el epitelio pigmentario de la retina (EPR) utilizando un modelo de pez cebra transgénico. La adaptación del protocolo para incorporar la modulación de la vía de señalización utilizando compuestos farmacológicos es ampliamente detallada. Se desarrolló una plataforma de MATLAB para cuantificar la regeneración de RPE basada en la pigmentación, que se presenta y discute.

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Keywords: ZebrafishRetinal Pigment EpitheliumRPERegenerationNitroreductaseMetronidazoleMATLABRpEGENAblationTransgenicEGFPPTUPharmacological Treatment

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