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Purificazione e identificazione di proteine specifiche per tipo cellulare da tessuti complessi utilizzando una linea murina di topo di metionina tRNA sintetasi mutante
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Cell-Type Specific Protein Purification and Identification from Complex Tissues Using a Mutant Methionine tRNA Synthetase Mouse Line
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Purificazione e identificazione di proteine specifiche per tipo cellulare da tessuti complessi utilizzando una linea murina di topo di metionina tRNA sintetasi mutante

DOI:
10.3791/63713-v

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07:39 min

•

April 13, 2022

•

, , , , , ,
1Max-Planck-Institute for Brain Research,Synaptic Plasticity Department, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology,Veterinary School, Complutense University of Madrid

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:40Tissue Harvesting, Lysis, and Protein Extraction
  • 03:03Protein Purification
  • 05:28Results: Cell-Type-Specific Protein Labeling with Azidonorleucine
  • 06:35Conclusion

Summary

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Questo protocollo descrive come eseguire la marcatura proteica specifica del tipo di cellula con azidonorleucina (ANL) utilizzando una linea murina che esprime una sintetasi tRNA mutante L274G-Metionina (MetRS*) e i passaggi necessari per l'isolamento delle proteine marcate specifiche del tipo di cellula. Descriviamo due possibili vie di somministrazione di ANL in topi vivi mediante (1) acqua potabile e (2) iniezioni intraperitoneali.

Tags

Cell-type SpecificProtein PurificationProtein IdentificationMutant Methionine TRNA SynthetaseCell Type Specific ProteinsIn VitroIn VivoImmunofluorescentAlkylationIodoacetamideBuffer ExchangeClick ChemistryAzidonorleucine IncorporationNeutravidin Binding

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