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Uma estratégia de enriquecimento de ponta de spin para análise simultânea de N-glicopeptídeos e Fosfopeptídeos de Tecidos Pancreáticos Humanos
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JoVE 신문 생화학
A Spin-Tip Enrichment Strategy for Simultaneous Analysis of N-Glycopeptides and Phosphopeptides from Human Pancreatic Tissues

Uma estratégia de enriquecimento de ponta de spin para análise simultânea de N-glicopeptídeos e Fosfopeptídeos de Tecidos Pancreáticos Humanos

DOI:
10.3791/63735-v

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09:16 min

•

May 04, 2022

•

, ,
1Department of Chemistry,University of Wisconsin-Madison, 2School of Pharmacy,University of Wisconsin-Madison

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 01:12Tissue Cryo-Pulverization, Lysis, Protein Extraction
  • 03:35Protein Digestion and Desalting
  • 05:36Dual-Functional Ti(IV) Simultaneous Enrichment
  • 07:19Results: Dual-Functional Ti(IV)-IMAC Enrichment and Mass Spectrometry Analysis of Protein N-Glycosylation and Phosphorylation in Pancreatic Tissues
  • 08:37Conclusion

Summary

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Modificações pós-translacionais (PTMs) alteram estruturas e funções proteicas. Métodos para o enriquecimento simultâneo de vários tipos de PTM podem maximizar a cobertura nas análises. Apresentamos um protocolo utilizando cromatografia de afinidade metálica ti(IV) automobilizada duplamente, seguida de espectrometria de massa para o enriquecimento simultâneo e análise da proteína N-glicosilação e fosforilação em tecidos pancreáticos.

Tags

N-glycopeptidesPhosphopeptidesTitanium Immobilized Metal Affinity ChromatographyDual-functional EnrichmentSimultaneous AnalysisDisease Biomarker DiscoveryDiabetesCancerSpin TipsCentrifugationLysis BufferProtease InhibitorPhosphatase InhibitorSonicationMass Spectrometry Analysis

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