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생화학
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代謝標識および質量分析による老化および非分裂培養細胞におけるタンパク質代謝回転率の測定
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문
생화학
Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells with Metabolic Labeling and Mass Spectrometry
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Click here for the English version.
代謝標識および質量分析による老化および非分裂培養細胞におけるタンパク質代謝回転率の測定
DOI:
10.3791/63835-v
•
08:52 min
•
April 06, 2022
•
Matthew Payea
,
Myriam Gorospe
,
Nathan Basisty
1
Laboratory of Genetics and Genomics, National Institute on Aging Intramural Research Program
,
National Institutes of Health
,
2
Translational Gerontology Branch, National Institute on Aging Intramural Research Program
,
National Institutes of Health
Chapters
00:05
Introduction
00:58
Labeling of Cells Pulsed SILAC and Harvest of Lysates
02:29
In-Solution Trypsin Digestion and Sample Clean-Up with Solid-Phase Extraction (SPE)
04:15
Data-Dependent Acquisition Mass Spectrometry Analysis and Calculation of Protein Half-Lives
06:31
Results: Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells Using pSILAC Mass Spectrometry
08:13
Conclusion
Summary
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このプロトコルは、パルスSILACによる老化細胞および非分裂細胞の代謝標識、非標的質量分析分析、およびタンパク質半減期の合理化された計算のためのワークフローを記述します。
Tags
Protein Turnover
Senescent Cells
Non-dividing Cells
Metabolic Labeling
Mass Spectrometry
SILAC
Protein Homeostasis
Cellular Stress
Aging
Neurodegenerative Disease
LC-MS
Trypsin
Urea
Ammonium Bicarbonate
Dithiothreitol
Iodoacetamide
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