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Usando Microfluidos e Microscopia de Fluorescência para Estudar a Dinâmica de Montagem de Filamentos e Pacotes de Actin Único
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JoVE 신문 생화학
Using Microfluidics and Fluorescence Microscopy to Study the Assembly Dynamics of Single Actin Filaments and Bundles

Usando Microfluidos e Microscopia de Fluorescência para Estudar a Dinâmica de Montagem de Filamentos e Pacotes de Actin Único

DOI:
10.3791/63891-v

•

08:02 min

•

May 05, 2022

•

, , , ,
1Université Paris Cité, CNRS,Institut Jacques Monod

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:40Polydimethylsiloxane (PDMS) Chamber Assembly
  • 01:45Connect Microfluidic Device
  • 03:11Configuring the Setup with Standard Flow Rates and Changing Solution
  • 04:21Basic Single Filament Experiment: Adenosine Diphosphate (ADP)-Actin Barbed End Depolymerization
  • 06:45Results: Polymerization of Actin Filaments from Spectrin-Actin Seeds when Exposed to Different Actin Binding Proteins
  • 07:24Conclusion

Summary

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Apresentamos protocolos para ensaios microfluidos de filamento de actina simples, em combinação com microscopia de fluorescência, que permitem monitorar com precisão filamentos de actina individuais em tempo real, expondo-os sequencialmente a diferentes soluções proteicas.

Tags

MicrofluidicsFluorescence MicroscopyActin FilamentsActin BundlesAssembly DynamicsActin-binding ProteinsPDMS ChamberF-bufferPressure ControlAir Bubbles

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