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Desarrollo de líneas celulares musculares knock-out utilizando la edición de genes CRISPR/Cas9 mediada por lentivirus

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JoVE 신문 유전학

Development of Knock-Out Muscle Cell Lines using Lentivirus-Mediated CRISPR/Cas9 Gene Editing

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Desarrollo de líneas celulares musculares knock-out utilizando la edición de genes CRISPR/Cas9 mediada por lentivirus

DOI:

10.3791/64114-v

•

10:12 min

•

June 16, 2022

•

Mathilde Beaufils, Amandine Tourel, Anne Petiot, Nicole B. Halmai, Dave J. Segal, John Rendu, Isabelle Marty

¹University Grenoble Alpes, INSERM, U1216, CHU Grenoble Alpes, Grenoble Institut Neurosciences, ²Genome Center,University of California, Davis

Chapters

00:05Introduction
00:43CRISPR Guide Design
02:03Plasmid Cloning
03:43Lentivirus Production
06:28Myoblast Transduction
07:20Functional Characterization of Edited Clones
08:53Results: Development of RYR1-Knock Out Human Muscle Cell Line
09:42Conclusion

Summary

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El protocolo describe cómo generar mioblastos knock-out utilizando CRISPR/Cas9, desde el diseño de arneses guía hasta la clonación celular y caracterización de los clones knock-out.

Tags

CRISPR/Cas9 Gene Editing Knock-out Muscle Cells Lentivirus IPS Cells Guide RNA PCR Agarose Gel Restriction Enzymes Plasmid Cloning

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