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出芽酵母における近接ライゲーションと定量PCRによる相同組換え中間体の検出

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JoVE 신문 유전학

Detection of Homologous Recombination Intermediates via Proximity Ligation and Quantitative PCR in Saccharomyces cerevisiae

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出芽酵母における近接ライゲーションと定量PCRによる相同組換え中間体の検出

DOI:

10.3791/64240-v

•

07:55 min

•

September 11, 2022

•

Diedre Reitz, Jérôme Savocco, Aurèle Piazza, Wolf-Dietrich Heyer³

¹Department of Microbiology & Molecular Genetics,University of California, Davis, ²Laboratory of Biology & Modeling of the Cell,École Normale Supérieure de Lyon, ³Department of Molecular & Cellular Biology,University of California, Davis

Chapters

00:05Introduction
00:50DLC Assay
01:54Cell Spheroplasting, Lysis, and Restriction Site Restoration
03:19Restriction Enzyme Digest and Intramolecular Ligation
05:15Results: DLC and DLE Assay Analysis of D-Loops After DSB Induction
07:02Conclusion

Summary

자동 번역

D-ループキャプチャー(DLC)およびD-ループ伸長(DLE)アッセイは、近接ライゲーションの原理と定量的PCRを利用して、出芽酵母の誘導性二本鎖切断部位でのDループ形成、Dループ伸長、および産物形成を定量化します。

Tags

Keywords: Homologous Recombination D-loop Proximity Ligation Quantitative PCR Saccharomyces Cerevisiae BRCA2 Bloom Syndrome Werner Syndrome UV Cross-linking Spheroplasting Restriction Enzyme Buffer

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