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Detecção de Intermediários de Recombinação Homóloga via Ligadura de Proximidade e PCR Quantitativa em Saccharomyces cerevisiae
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Detection of Homologous Recombination Intermediates via Proximity Ligation and Quantitative PCR in Saccharomyces cerevisiae

Detecção de Intermediários de Recombinação Homóloga via Ligadura de Proximidade e PCR Quantitativa em Saccharomyces cerevisiae

DOI:
10.3791/64240-v

•

07:55 min

•

September 11, 2022

•

, , ,
1Department of Microbiology & Molecular Genetics,University of California, Davis, 2Laboratory of Biology & Modeling of the Cell,École Normale Supérieure de Lyon, 3Department of Molecular & Cellular Biology,University of California, Davis

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:50DLC Assay
  • 01:54Cell Spheroplasting, Lysis, and Restriction Site Restoration
  • 03:19Restriction Enzyme Digest and Intramolecular Ligation
  • 05:15Results: DLC and DLE Assay Analysis of D-Loops After DSB Induction
  • 07:02Conclusion

Summary

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Os ensaios de captura de loop D (DLC) e extensão de loop D (DLE) utilizam o princípio da ligadura de proximidade juntamente com a PCR quantitativa para quantificar a formação de D-loop, a extensão de D-loop e a formação de produtos no local de uma ruptura induzível de fita dupla em Saccharomyces cerevisiae.

Tags

Homologous RecombinationD-loopProximity LigationQuantitative PCRSaccharomyces CerevisiaeBRCA2Bloom SyndromeWerner SyndromeUV Cross-linkingSpheroplastingRestriction Enzyme Buffer

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