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Combinazione di microscopia a compensazione e fluorescenza per visualizzare i cambiamenti nell'espressione genica e le risposte fisiologiche a Plasmodiophora brassicae
JoVE 신문
생물학
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JoVE 신문 생물학
Combining Clearing and Fluorescence Microscopy for Visualising Changes in Gene Expression and Physiological Responses to Plasmodiophora brassicae
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Combinazione di microscopia a compensazione e fluorescenza per visualizzare i cambiamenti nell'espressione genica e le risposte fisiologiche a Plasmodiophora brassicae

DOI:
10.3791/64297-v

•

06:58 min

•

August 05, 2022

•

, , , , , ,
1Integrative Plant Biology Team,Institute of Plant Genetics Polish Academy of Sciences, 2ZMBP-Center for Plant Molecular Biology,University of Tübingen, 3Department of General Botany, Institute of Experimental Biology, Faculty of Biology,Adam Mickiewicz University

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 01:36Tissue Preparation and Fixation
  • 02:13Tissue Embedding and Sectioning
  • 03:03Vibratome Sectioning and Specimen Clearing
  • 04:03Staining Procedure and Microscopy
  • 04:49Results: Microscopic Analysis of the Biotrophic Interaction and Gene Expression Regulations Between Plasmodiophora brassicae and Arabidopsis Plants
  • 06:06Conclusion

Summary

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Il presente protocollo descrive un metodo ottimizzato per l'osservazione istologica delle galle indotta da Plasmodiophora brassicae. Le sezioni vibratomo degli ipocotili vengono eliminate prima dell'imaging a fluorescenza per studiare il coinvolgimento dei fattori di trascrizione e dei fitormoni durante la progressione della malattia. Questo protocollo supera i limiti di incorporamento della resina, consentendo la visualizzazione nelle piante di proteine fluorescenti.

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Keywords: Plasmodiophora BrassicaeClubrootGene ExpressionFluorescence MicroscopyClearingGallsPhytohormoneLignificationPlant-pathogen InteractionAgarose EmbeddingVibratome Sectioning

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