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Ordinamento negativo dei neuroni dei nuclei attivati dalla fluorescenza combinato con il sequenziamento dell'RNA dei singoli nuclei per studiare la nicchia neurogena dell'ippocampo
JoVE 신문
신경과학
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JoVE 신문 신경과학
Fluorescence-Activated Nuclei Negative Sorting of Neurons Combined with Single Nuclei RNA Sequencing to Study the Hippocampal Neurogenic Niche
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Ordinamento negativo dei neuroni dei nuclei attivati dalla fluorescenza combinato con il sequenziamento dell'RNA dei singoli nuclei per studiare la nicchia neurogena dell'ippocampo

DOI:
10.3791/64369-v

•

08:16 min

•

October 20, 2022

•

, , , ,
1The Francis Crick Institute, 2MSD R&D Innovation Centre

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 01:08Dissection of the Dentate Gyrus (DG)
  • 01:53Tissue Dissociation, Single Nuclei Isolation, and Anti-NeuN Immunostaining
  • 04:03Fluorescence Activated Nuclei Sorting (FANS) to Exclude Neuronal Populations
  • 05:12Preparation of the Single Nuclei Suspension to Perform Single Nuclei RNA Sequencing
  • 05:59Results: Preparation of a Suspension of Non-Neuronal Single Nuclei Isolated from the Dentate Gyrus (DG)
  • 07:51Conclusion

Summary

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Presentato qui è un metodo per sequenziare singoli nuclei isolati dal giro dentato del topo che esclude la maggior parte dei neuroni attraverso l'ordinamento dei nuclei attivati dalla fluorescenza (FAN). Questo approccio genera profili di espressione di alta qualità e facilita lo studio della maggior parte degli altri tipi di cellule rappresentati nella nicchia, comprese le popolazioni scarse come le cellule staminali neurali.

Tags

Fluorescence-Activated Nuclei Negative SortingSingle Nuclei RNA SequencingHippocampal Neurogenic NicheNeural Stem CellsAstrocytesOligodendrocytesAdult Hippocampal NeurogenesisDentate GyrusBrain DissectionDounce HomogenizerNuclei SuspensionCell StrainerCentrifugation

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