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Détection simple et rapide de l’activité de la topoisomérase 1 basée sur l’amplification du cercle roulant dans des échantillons biologiques bruts
JoVE 신문
암 연구학
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JoVE 신문 암 연구학
Simple and Fast Rolling Circle Amplification-Based Detection of Topoisomerase 1 Activity in Crude Biological Samples
DOI:

10:13 min

December 02, 2022

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Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:51Preparation of Functionalized Slides
  • 01:34Generation of Closed Circular Substrates
  • 02:16Blocking of the Wellmaker and Hybridization of the Circles
  • 03:48Rolling Circle Amplification (RCA) and Visualization by Fluorescence Microscopy
  • 05:54Coupling of HRP-Conjugated Antibody to Rolling Circle Products and Visualization
  • 07:57Results: Detection of Topoisomerase 1 Activity Using the REEAD Assay
  • 09:29Conclusion

Summary

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Un protocole pour la détection sensible et quantitative de l’activité de la topoisomérase 1 à l’aide du test de détection de l’activité enzymatique améliorée du cercle roulant est décrit. La méthode permet de détecter l’activité de la topoisomérase 1 à partir de composants purifiés ou d’extraits cellulaires/tissulaires. Ce protocole a de nombreuses applications dans tous les domaines impliquant la détection de l’activité enzymatique.

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