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Detección simple y rápida basada en la amplificación del círculo rodante de la actividad de la topoisomerasa 1 en muestras biológicas crudas
JoVE 신문
암 연구학
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JoVE 신문 암 연구학
Simple and Fast Rolling Circle Amplification-Based Detection of Topoisomerase 1 Activity in Crude Biological Samples
DOI:

10:13 min

December 02, 2022

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Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:51Preparation of Functionalized Slides
  • 01:34Generation of Closed Circular Substrates
  • 02:16Blocking of the Wellmaker and Hybridization of the Circles
  • 03:48Rolling Circle Amplification (RCA) and Visualization by Fluorescence Microscopy
  • 05:54Coupling of HRP-Conjugated Antibody to Rolling Circle Products and Visualization
  • 07:57Results: Detection of Topoisomerase 1 Activity Using the REEAD Assay
  • 09:29Conclusion

Summary

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Se describe un protocolo para la detección sensible y cuantitativa de la actividad de la topoisomerasa 1 utilizando el ensayo de detección de actividad enzimática mejorada de círculo rodante. El método permite la detección de la actividad de la topoisomerasa 1 a partir de componentes purificados o extractos de células/tejidos. Este protocolo tiene amplias aplicaciones en cualquier campo que implique la detección de actividad enzimática.

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