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Screening Sperm for the Rapid Isolation of Germline Edits in Zebrafish

Triagem de espermatozoides para o isolamento rápido de edições germinativas em peixes-zebra

DOI:
10.3791/64686-v

•

05:55 min

•

February 10, 2023

•

, ,
1Department of Molecular Biosciences,The University of Texas at Austin, 2Department of Nutritional Sciences,The University of Texas at Austin

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:50Fish Sperm Collection
  • 02:11DNA Extraction and Amplification
  • 03:14PCR Amplicon Separation by Gel Electrophoresis
  • 04:20Results: Mutation Analysis of Sperm
  • 05:16Conclusion

Summary

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As tecnologias CRISPR-Cas revolucionaram o campo da edição do genoma. No entanto, encontrar e isolar a edição de linha germinal desejada continua sendo um grande gargalo. Portanto, este protocolo descreve um método robusto para rastrear rapidamente espermatozoides de peixe-zebra injetados com CRISPR F0 para edições germinativas usando técnicas padrão de PCR, digesto de restrição e eletroforese em gel.

Tags

Sperm ScreeningGermline EditsZebrafishCRISPRF0IndelsGenome EditsIn Vitro FertilizationPCRGel ElectrophoresisAnesthesiaCloacaCapillary ActionSodium HydroxideThermal CyclerTris-HClPCR ReactionAgarose Gel

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