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Investigação da Biologia e Metabolismo da Gordura Bege Utilizando o Sistema de Ativação CRISPR SunTag-p65-HSF1
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JoVE 신문 생체공학
Investigation of Beige Fat Biology and Metabolism Using the CRISPR SunTag-p65-HSF1 Activation System

Investigação da Biologia e Metabolismo da Gordura Bege Utilizando o Sistema de Ativação CRISPR SunTag-p65-HSF1

DOI:
10.3791/64849-v

•

09:52 min

•

January 06, 2023

•

, ,
1Obesity and Comorbidities Research Center,State University of Campinas, 2Department of Structural and Functional Biology, Institute of Biology,State University of Campinas

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:53Molecular Cloning
  • 04:34In Vivo Injection of Adeno-Associated Virus (AAV) into the Inguinal White Adipose Tissue (iWAT)
  • 06:14In Vitro Differentiation of Stromal Vascular Cells (SVFs) into Beige Adipocytes
  • 07:23In Vitro AAV Infection of SVFs
  • 08:11Results: SPH-Induced Expression of Endogenous Prdm16 for Enhanced Oxygen Consumption
  • 09:23Conclusion

Summary

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Este protocolo apresenta o uso do CRISPR SunTag-p65-HSF1 (SPH) em adipócitos (AdipoSPH) como uma estratégia alternativa ao vírus adenoassociado (AAV) para investigar a biologia da gordura bege. A injeção in vivo de sgRNA carreador de AAV visando o gene endógeno Prdm16 é suficiente para induzir o desenvolvimento de gordura bege e melhorar o programa do gene termogênico.

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Keywords: CRISPRSunTagP65-HSF1Activation SystemAdipocytesGain-of-functionAdeno-associated VirusPRDM16SgRNACloningVirus Production

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