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Generazione di topi knockout specifici per il grasso bruno utilizzando un sistema combinato di RNA a guida singola Cre-LoxP, CRISPR-Cas9 e virus adeno-associato
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JoVE 신문 생물학
Generation of Brown Fat-Specific Knockout Mice Using a Combined Cre-LoxP, CRISPR-Cas9, and Adeno-Associated Virus Single-Guide RNA System
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Generazione di topi knockout specifici per il grasso bruno utilizzando un sistema combinato di RNA a guida singola Cre-LoxP, CRISPR-Cas9 e virus adeno-associato

DOI:
10.3791/65083-v

•

03:58 min

•

March 24, 2023

•

, ,
1Section on Integrative Physiology and Metabolism, Research Division, Joslin Diabetes Center,Harvard Medical School

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:55Surgery for Adeno‐Associated Virus (AAV) Injection into the Brown Adipose Tissue (BAT) in Mice
  • 02:41Results: Identifying the Potential Flaws Leading to Unsuccessful Injection
  • 03:18Conclusion

Summary

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In questo protocollo, descriviamo le procedure tecniche per generare topi knockout specifici per il tessuto adiposo bruno (BAT) sfruttando un sistema combinato di Cre-LoxP, CRISPR-Cas9 e RNA a guida singola (sgRNA) del virus adeno-associato (AAV). I passaggi descritti includono la progettazione degli sgRNA, la preparazione delle particelle AAV-sgRNA e la microiniezione di AAV nei lobi BAT.

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